Modelo animal zfns

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Descripción general

Modelo animal de zfns: el modelo animal de nucleasa de dedo de zinc (zfns) es un modelo Animal experimental construido utilizando la tecnología de edición genética de nucleasa de dedo de zinc. La nucleasa del dedo de zinc está formada por la fusión de la proteína del dedo de zinc (zpm) y la nucleasa (foki), que pueden unirse específicamente a la secuencia de ADN objetivo, mientras que la nucleasa es responsable de cortar el adn, introduciendo así una ruptura de doble cadena en un sitio genético específico, induciendo mecanismos de reparación celular y logrando knocking genético, knocking o mutación.

Detalles del producto

I,Modelo animal zfnsPrincipios técnicos y mecanismos básicos

Zfns esLa primera generación de herramientas de edición genética programables, a través de la fusiónDominio de Unión al ADN(proteína del dedo de zinc) yDominio de corte de ADN(foki nucleasa) realiza la edición dirigida:

Dominio de la proteína del dedo de zinc:

por30 - 34 unidades repetidas de aminoácidosComposición, cada unidad pasaResiduos variables de 12 y 13 dígitos (rvds)Identificar bases específicas:

Tipo de RVD	Identificar bases	Especificidad
NI	Una	alto
NG	El T	alto
HD	C	alto
NN	G/A	Medio

Identificación de un solo dedo de zinc3 pb, conectado en serie 3 - 6 dianas9-18 pbSecuencia.

Dominio de corte foki:

necesitarDimerizaciónPara activar la función de corte → zfns necesita ser diseñado en parejas (brazo izquierdo / brazo derecho), y el sitio de Corte se encuentra entre los sitios de Unión de los dos brazos (zona espaciadora de 5 - 7 bp).

Mecanismo editorial:

Ruptura de doble cadena (dsb) → ruta de reparación de inicio celular:

Conexión terminal no homóloga (nhej): inserción / Deleción aleatoria (indels), que provoca un golpe genético.
Reparación dirigida homóloga (hdr): se necesita una plantilla de reparación exógena (como ssodn) para lograr mutaciones puntuales o inserción genética.

Avance tecnológico: Shou implementado vecesEdición dirigida del genoma de mamíferos(2005), abriendo la era de la edición genética precisa.

En segundo lugar,Modelo animal zfnsOptimización de procesos y tecnología

(1) pasos operativos estandarizados

(2) optimización de parámetros técnicos clave

pasos	Operación central	Optimización de la innovación
Diseño del objetivo	Evite las zonas de alta repetición / metilación, con intervalos de 5 - 7 BP	Predicción de software (zifit) mejora la eficiencia de la combinación
Montaje de dedos de zinc	Método de serie modular:

3 - 6 unidades de dedos de zinc en serie
Clonación de puerta de oro (bsai / bsmbi) | se completa la construcción en 6 días, con una tasa de éxito superior al 80%
- sí.Vector de expresión| vector de doble promotor (cmv / t7), que apoya la síntesis de arnm y la expresión de proteínas | adaptado a múltiples especies (pez cebra, ratón, cerdo) | 2
- sí.Método de entrega| microinyección de arnm zfns en óvulos fertilizados
Transfección de células somáticas + trasplante nuclear (animales grandes) | la entrega de arnm disminuye la Diana
- sí.Reparación y mejora| plantilla combinada de ssodna + inhibidor de nhej (scr7) | la eficiencia de HDR se triplica

III. casos de aplicación multiespecie y ventajas de los modelos

I) especies típicas y modelos de enfermedades

Especies	Genes Diana	Modelo de enfermedad	Eficiencia / Fenotipo	Valor de la investigación
Pez cebra	dorado	Albinismo	Ausencia de pigmentos del 95% de la generación F0	Selección de la función genética del desarrollo
Ratones	Rag2/IL2rg	Modelo de inmunodeficiencia	Doble knockout genético, Plataforma de trasplante humanizado	Estudio sobre el tratamiento de la inmunidad tumoral Yi
cerdo	GGTA1	Modelo de trasplante de Guan xenófobo	Eliminar el antígeno alfa - Gal y reducir el rechazo súper agudo	Desarrollo de órganos humanizados
Mosca de la fruta	amarillo	Mutación del color corporal	Tasa de mutación del sistema reproductivo 5,7% (modelo animal)	Verificación de la conservación de la función genética

Ii) escenarios de aplicación insustituibles

Editor regional de alto GC:

Sin restricciones de secuencia pam, se puede apuntar a áreas que crispr / cas9 no puede editar.

Demanda de baja tasa de pérdida de objetivos:

La tasa de pérdida de objetivo en la edición terapéutica fue inferior al 0,1% (crispr fue del 1 - 10%).

Grandes modelos animales:

La inmunogenicidad en especies como cerdos y vacas es menor que la de crispr.

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