Experimento del sistema crispr / cas12b

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Descripción general

Experimento del sistema crispr / cas12b: crispr / cas12b (anteriormente conocido como c2c1) pertenece al sistema crispr de clase 2 tipo V - B y es una importante herramienta de edición genética después de cas9 y cas12a.

Detalles del producto

I. mecanismos moleculares y características estructurales

I) definición y clasificación del sistema

CRISPR/Cas12b(anteriormente conocido comoC2c1) perteneceClase 2 tipo V - B sistema crisprEs una importante herramienta de edición genética después de cas9 y cas12a. Sus características centrales incluyen:

Mecanismo de orientación del ARN doble:

NecesidadcrARNContracrARN(se puede fusionar en sgrna) para guiar conjuntamente el corte dirigido, que tiene algunas características de cas9 y cas12a.

Modo de corte:

únicoDominio ruvicCortar ADN de doble cadena para formarEl extremo pegajoso de 5 - 6 NT(5 'prominente), propicio para la recombinación y reparación homólogas (hdr).

Identificación PAM:

DependenciaSecuencia T - Rich PAM(por ejemplo, 5 '- TTN - 3'), amplía la capacidad de edición del genoma rico en AT.

Ii) ventajas estructurales

Características	Cas12b	Comparación cas9 / cas12a
Tamaño de la proteína	Unos 1.100 aminoácidos(min)	Menos que cas9 (1600 aa) y cas12a (1300 aa)
Demanda de ARN	Se necesita crrna + tracrna (se puede fusionar en sgrna)	Más complejo que cas12a (solo se necesita crrna), pero más simplificado que cas9
Estabilidad térmica	Tipo sensible a la temperatura(activado a 40 - 55 ° c)	Se necesitan modificaciones de ingeniería para adaptarse a las células de mamíferos

II. ventajas tecnológicas y rendimiento

I) ventajas básicas

Baja tasa de pérdida de objetivos:

La detección Guide - SEQ muestra la tasa de pérdida de objetivosSignificativamente por debajo de cas9(las inserciones / faltas erróneas se reducen en más del 50%).

Alta especificidad:

La secuencia guiada por crrna es más larga (> 42 nt) y la precisión de puntería es mayor.

Modo de edición:

InducciónBaja tasa de mutación de inserción puraEs más propenso a producir pequeñas pérdidas de fragmentos y reducir la imprevisibilidad funcional.

Adaptabilidad del Vector viral:

Los pequeños pesos moleculares son más fáciles de empaquetar.Vector AAV o LentivirusMejorar la eficiencia de la entrega in vivo.

(2) comparación con sistemas similares

parámetro	Cas12b	Cas9	Cas12a
Secuencia PAM	5 '- TTN - 3' (enriquecimiento t)	5 '- Ngg - 3' (enriquecimiento g)	5 '- tttv - 3' (enriquecimiento t)
Extremo de corte	黏性末端（5' 突出）	Extremo plano	黏性末端（5' 突出）
Actividad de corte Trans	❌ Nada	❌ Nada	✅ Sí (se puede cortar ssdna)
Edición multigenética	Se necesita más ARN SGR	Se necesita más ARN SGR	✅ Soporte para conjuntos de crrna

Nota: modo de corte cas12b lo hace enTerapia génicaEvitar la producción de nuevos epítopos y reducir el riesgo inmunológico.

III. escenarios de aplicación y casos de vanguardia

I) aplicaciones biomédicas

Tratamiento Antiviral:

El VIH: una sola edición en células T puede eliminar todo el VIH infeccioso, lo que es más eficiente que cas9.

Reparación de enfermedades genéticas:

Implementación de la ruta HDR conjuntaReparación precisa del gen de la beta - talasemiaLa hemoglobina vuelve a los niveles normales.

Inmunidad tumoral:

EdiciónDoble objetivo PD - 1 / ctla - 4Reducir el agotamiento de las células car - T.

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