Es servicio de tecnología de tiro

I,Es servicio de tecnología de tiroDefinición técnica y principios básicos

Es tecnología de tiroEs un método de edición genética basado en la Recombinación homóloga de células madre embrionarias (es), que realiza modificaciones precisas como el knock - in genético (ko), el knock - in condicional (cko), el knock - in genético (ki) y la mutación puntual (pm) mediante la integración de puntos fijos de ADN exógeno en lugares específicos del genoma. Sus principios básicos incluyen:

1. Mecanismo de reorganización homóloga:

• El diseño contieneBrazo homólogoUn vector (homólogo al GEN objetivo) que inserta una secuencia exógena (como un gen marcador de selección) en el sitio objetivo a través de una reorganización homóloga.

2. Sistema de selección positiva y negativa:

• Marcadores de selección en curso(por ejemplo, neochan): introduzca la región homóloga y seleccione las células es que se han recombinado con éxito.

• Marcador de selección negativo(por ejemplo, HSV - tk / dta): situado fuera del brazo homólogo, elimina las células insertadas al azar.

3. Versatilidad de las células madre embrionarias:

• Las células es modificadas se inyectan en blastocitos y se desarrollan en ratones quimera (f0), obteniendo un modelo genético estable a través de la transmisión de la línea germinal.

Posicionamiento tecnológico: es Shooting es el estándar de oro de la era pre - crispr, especialmente adecuado paraEdición de grandes fragmentos(> 10 kb) yModificación genética compleja(como golpear condicionalmente).

En segundo lugar,Es servicio de tecnología de tiroProcesos operativos estandarizados e innovación tecnológica

I) proceso tradicional de puntería es (7 - 12 meses)

Análisis de pasos clave:

1. Construcción de transportistas:

• La longitud del brazo homólogo suele ser de 3 - 5 kb, y la inserción de grandes fragmentos requiere un portador bac.

2. Selección de líneas celulares es:

• Líneas comunes: 129s6 / svevtac (alta eficiencia de recombinación), c57bl / 6n (fondo puro).

3. Preparación de quimera:

• La tasa de Quimerismo después de la inyección de blastocitos es de aproximadamente 20 - 70%, que debe ser seleccionada intuitivamente a través de marcadores de color peludo, como huéspedes albinos.

(2) innovación tecnológica: las células EPS apuntan

Células EPS(extended pluripotent stem cells) fue reportado por científicos chinos en Shou en 2017, y sus ventajas incluyen:

1. Mejora de la eficiencia:

• La eficiencia de la Diana alcanza las células es tradicionales.10 - 100 veces.

2. Acortamiento del ciclo:

• La quimera se obtiene en un solo paso, ahorrando 3 meses de transmisión de líneas de semillas.

3. Mejora de la versatilidad:

• La inyección de blastocitos en una sola célula puede producir una quimera del 99,99%.