Modelo animal talens

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Descripción general

La construcción del modelo animal de talens es un modelo Animal experimental construido utilizando la tecnología de edición genética de talens. Talens es capaz de identificar y cortar específicamente la secuencia de ADN objetivo fusionando el dominio de Unión al ADN del efector similar al factor de activación de transcripción (tale) con el dominio de corte de la nucleasa (foki), logrando así una edición precisa del genoma.

Detalles del producto

Modelo animal talens

I. principios tecnológicos y avances básicos de talens

(1) diseño estructural y mecanismo de acción

Talens (transccription activator - like effective nuclear) es unNucleasa de ingeniería artificialConsta de dos partes:

Dominio de reconocimiento de ADN (proteína tale):

porUnidades repetidas de 34 aminoácidosComposición, cada unidad pasaAminoácidos variables en las posiciones 12 y 13 (rvds)Reconocimiento específico de una sola base:

Tipo de RVD	Identificar bases	Intensidad de unión
NI	Una	Alta especificidad
NG	El T	Alta especificidad
HD	C	Alta especificidad
NN	G/A	Reconocimiento cruzado

La longitud de la secuencia de identificación suele ser15-20 pbAsegúrese de apuntar a wei.

Dominio de corte de ADN (nucleasa foki):

Es necesario formarDímeroPara cortar el ADN es necesario que talens se diseñe en parejas (brazo izquierdo y derecho) y el sitio de Corte se encuentra entre ambos brazos (la zona de separación suele ser de 12 - 20 bp).

Ii) mecanismos de edición genética

Rotura de doble cadena (dsb):

Tale se une a la secuencia objetivo → dimerización foki → Corte de la doble cadena de adn.

Ruta de reparación:

Conexión terminal no homóloga (nhej): inserción / Deleción aleatoria (indels), que provoca un golpe genético.
Reparación dirigida homóloga (hdr): Es necesario proporcionar plantillas de reparación exógena para lograr una inserción precisa o mutaciones puntuales.

Avance tecnológico: Shu implementado vecesSitio genómico arbitrarioCorte preciso, y la tasa de pérdida de objetivo es menor que la tecnología zfn temprana.

En segundo lugar,Modelo animal talensProceso de construcción

(1) pasos operativos estandarizados

(2) optimización de tecnologías clave

pasos	Operación central	Programa de innovación
Diseño del objetivo	Evite las áreas de secuencia repetida / metilación y optimice la zona de intervalo a 14 - 18 BP	Predicción de software (talen target) mejora la tasa de éxito
Montaje de módulos	Clonación de la puerta de oro:

6 módulos en serie (+ 63 arquitectura)
Conexión de enzima (bsai / bsmbi) | la construcción se completa en 6 días, lo que mejora la eficiencia en 5 veces
- sí.Vector de expresión| vector de doble promotor de mamíferos (cmv / t7), que apoya la transfección celular y la síntesis de arnm | aplicaciones adaptadas a múltiples especies (pez cebra, ratón, células IPS humanas) |
- sí.Verificación de la actividad| el sistema híbrido único de levadura o las pruebas genéticas de reporte celular | la sustitución tarda en las células es en apuntar y el ciclo se reduce a 1 semana
- sí.Entrega de embriones| microinyección de óvulos fertilizados:
Arnm: transcripciones in vitro de talens
Complejo rnp: Complejo proteico tale - foki | RNP reduce el efecto de desescalada y mejora la seguridad

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