Su - DHL - 10 células de linfoma de células B humanas

Su - DHL - 10 células de linfoma de células B humanas

¡¡ todos los productos de la compañía son solo para experimentos científicos y no se utilizan fuera de otros experimentos científicos!

Detalles del producto:

Fuente del género: personas

Sexo y edad:25Años, varón

Características de crecimiento: crecimiento en masa suspendido

Morfología celular: linfoide

Especificaciones celulares:1 x 106 células/T25o1 ml de aguaCriodepósito

Condiciones de cultivo:RPMI-1640 Medio+10% suero bovino fetal37℃5% de CO2

Condiciones de congelación:90% de FBS + 10% de DMSO

Método de transmisión:1: 3De generación en generación, 2 - 3Transmisión celestial1generación

Operación de cultivo celular:

1) células de reanimación:El siguiente tratamiento de Criopreservación de cultivo celular es solo para referencia, y los pasos de operación específicos son principalmente las instrucciones del producto con el producto.

El criodepósito que contenía 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se mezcló uniformemente con un medio de cultivo de 4 ML. Centrifugar durante 3 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo para soplar bien. A continuación, todas las suspensiones celulares se añaden a un matraz que contiene un medio adecuado para el cultivo durante la noche (o las suspensiones celulares se añaden a una placa de Petri de 6 cm, se añaden unos 4 ml de medio para el cultivo durante la noche). El tercer día se cambió el líquido y se examinó la densidad celular.

2) transmisión celular:Si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de paso.

a、 Abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

b、 Añadir 1 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,02% edta) al matraz de cultivo para que el líquido digestivo se infiltre en todas las células, colocar el matraz de cultivo en una incubadora a 37 ° C para digerir 1 - 3 Min (dependiendo de la digestión celular), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones, golpear ligeramente el matraz de cultivo y agregar 2 - 3 ml de medio de cultivo para terminar la digestión. Después de mezclar suavemente, Póngalo en un tubo centrífuga estéril, centrifugarlo a 1000 RPM durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplarlo bien.

c、 Dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 y cultivarla en una incubadora.

3) Criopreservación celular:Cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25;

a、 Recoger las células y el medio de cultivo celular, cargarlo en un tubo centrífuga estéril, centrifugarlo durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, lavarlo una vez con pbs, descartar todo el PBS y realizar el recuento celular.

b、 Agregue el liofilizado de células libres de suero de acuerdo con el número de células, haga que la densidad celular sea de 5 × 106 a 1 × 107 / ml, mezcle suavemente, congele 1 ml de suspensión celular en cada liofilizado, preste atención al liofilizado para hacer un buen trabajo de identificación.

c、 Coloque el tubo de almacenamiento congelado en el refrigerador a - 80 ° C y transfiera al llenado de nitrógeno líquido para su almacenamiento después de 24 horas. Registre la ubicación del congelador para recogerlo la próxima vez.

Precauciones para el Cultivo celular:

I,Después de recibir la célula, primero observe si la botella celular está intacta, si el medio de cultivo tiene fugas, turbidez y otros fenómenos, si hay los fenómenos anteriores, Póngase en contacto con nosotros a tiempo.

En segundo lugar,Lea cuidadosamente las instrucciones de la célula para comprender la información relacionada con la célula, como la morfología celular, el medio de cultivo utilizado, la proporción de suero, las citocinas necesarias, etc., para asegurarse de que las condiciones de cultivo celular son consistentes, y si las condiciones de cultivo son inconsistentes y causan problemas con la célula, la responsabilidad recae en el cliente.

En tercer lugar,Limpie la superficie del vial celular con un 75% de alcohol y observe el Estado celular bajo un microscopio. Debido a problemas de transporte, es normal que algunas células formen fragmentos debido a cambios de temperatura y accidentes violentos. Después de observar el Estado celular, el 75% de la pared del vial de desinfección con alcohol colocó el vial t25 en una incubadora a 37 ° C durante 2 - 4 horas.

4,Las células adherentes se pueden digerir, las células suspendidas se mezclan directamente para recoger las células, 900 RPM - 1000 RPM se centrifugan durante 3 minutos y se abandonan el sobrenadante. Añadir 5 ml de células de suspensión pesada pbs, luego centrifugar 900 RPM - 1000 RPM durante 3 minutos, suspender las células con un medio fresco y vacunarlas en un nuevo frasco o placa de petri, colocarlas en una incubadora para su cultivo.

V,Se pide a los clientes que utilicen medios de cultivo en las mismas condiciones para el cultivo celular.

Vi, Se recomienda que los clientes tomen varias fotos de las células tres días antes de recibir las células para registrar el Estado de las células y facilitar la comunicación con nuestro Departamento técnico. Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear la visita de regreso hasta que se resuelva el problema.

Siete,La célula es solo para investigación científica.

8,Nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Se recomienda la primera transmisión después de recibir la célula 1: 2.

Nueve,Nota: la transmisión de 1: 2 es una botella t25, dos botellas t25 o dos placas de Petri de 6 cm. No una botella t25 pasa por dos placas de Petri de 10 cm.

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