Células madre mesenquimales de rata

Perfil de la célula:

El Periostio es una capa de tejido conjuntivo que cubre la superficie ósea. El periostio está anclado al hueso a través de fibras de piel de verano, actuando como un puente de conexión entre el tejido muscular externo y el hueso interno, una estructura que ayuda a mantener la integridad del periostio.

El cartílago óseo consta de dos partes, la capa exterior de fibra suelta y la capa interna de célula densa, la capa de fibra contiene fibrocitos, fibras de colágeno, fibras elásticas y microtubulos. La mayoría de las capas celulares son células madre de origen perióseo, que son similares a las células madre mesenquimales de origen medular y tienen el potencial de diferenciación multidireccional.

La reparación ósea, la remodelación y la renovación están estrechamente relacionadas con las células madre en el periesqueleto. En condiciones fisiológicas normales, el tejido perióseo desempeña un papel en el mantenimiento de la renovación ósea y la remodelación, en la que las células madre pueden diferenciarse tanto en osteoblastos a través de la Osteogénesis intramembranosa como en condrocitos a través de la Osteogénesis intracondral.

Características celulares:

1(...) Las células provienen del tejido perióseo articular normal de los animales de experimentación.

2)Identificación celular:CD90oCD73La Tinción fluorescente fue positiva.

3)Las células identificadas tienen una pureza superior90%.

4)No contieneEl VIH-1, VHB,VHC, micoplasma, levadura Y.

5)Modo de crecimiento celular: células fibrosas, cultivo pegado a la pared.

Medios de cultivo recomendados:

Recomendamos usarDelfoGeneración original Epitelio Sistema de cultivo celular Como reactivo de cultivo de la célula.

Informe experimental:

I. aislamiento y cultivo:

1. en condiciones estériles, se extrae el tejido auricular de las ratas de SD de 1 - 3 días de edad, y luego se limpia este bloque de tejido dos veces con PBS para cortar el tejido en aproximadamente 1 mm3;

2. añadir 4 ml de líquido digestivo enzimático (0,1% y 0,1% colagenasa tipo i) al bloque de tejido, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, luego soplar con un gotero para hacer una suspensión unicelular, precipitar y recoger el suero naturalmente, y colocar a 4 ° C después de terminar la digestión con un medio de cultivo FBS que contiene 10%;

3. añadir 3 a 4 ml de líquido digestivo enzimático al tejido restante, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, recoger el suero superior de acuerdo con el método anterior y terminar la digestión y colocarlo a 4 ° c. repetir este paso 2 - 3 veces hasta que el tejido sea digerido;

4. filtrar el líquido digestivo celular con un tamiz de acero inoxidable de 200 mallas, centrifugar 1200r / MIN durante 10 minutos, descartar el sobrenadante, precipitar las células con suspensión de medio de cultivo que contiene 10% FBS dmem / f12, inocular en un frasco de cultivo de 25 cm 2, colocarlas a 37 ° C y cultivarlas en una incubadora de CO2 al 5%;

5. después de pegar la pared a una velocidad diferencial durante 1 hora, se succiona el medio de cultivo y se inocula en una placa de 6 agujeros para continuar el cultivo de acuerdo con las necesidades del experimento;2. identificación por inmunofluorescencia:

1. cuando los miocitos auriculares crezcan hasta el 80% de fusión, abandone el medio de cultivo, lave las células 2 veces con PBS cultivados a temperatura ambiente, 10 minutos cada vez, y luego fije las células a temperatura ambiente durante 15 minutos con poliformaldehído al 4%;

2. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego penetra la película con un 0,1% de Tritón X - 100 a 4 ° C durante 15 minutos;

3. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego cierra las células con un 4% de BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente;

4. diluir alfa - Acción un anticuerpo en una proporción de 1: 100, y luego colocarlo en un refrigerador a 4 ° C para incubar células durante la noche;

5. el PBS enjuaga las células tres veces, 10 minutos cada vez, diluye la resistencia secundaria a la alfa - Acción en una proporción de 1: 150 y las coloca durante 1 hora a 37 ° c;

6. enjuagar con PBS 3 veces, 10 minutos cada vez, observar la imagen bajo un microscopio fluorescente invertido y tomar fotos.

Productos que la compañía está vendiendo:

Heparina de rata(HS)Kit de prueba, nombre en inglés:Kit de ELISA HS

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Precauciones:

1. después de recibir la célula, primero observe si la botella celular está intacta, si el medio de cultivo tiene fugas, turbidez y otros fenómenos, si hay los fenómenos anteriores, Póngase en contacto con nosotros a tiempo.

2. lea cuidadosamente las instrucciones de la célula para comprender la información relacionada con la célula, como la morfología celular, el medio de cultivo utilizado, la proporción de suero, las citocinas necesarias, etc., para asegurarse de que las condiciones de cultivo celular sean consistentes, y si las condiciones de cultivo son inconsistentes y causan problemas con la célula, la responsabilidad recae en el cliente.

3. limpie la superficie del vial celular con un 75% de alcohol y observe el Estado celular bajo un microscopio. Debido a problemas de transporte, es normal que algunas células formen fragmentos debido a cambios de temperatura y accidentes violentos. Después de observar el Estado celular, el 75% de la pared del vial de desinfección con alcohol colocó el vial t25 en una incubadora a 37 ° C durante 4 - 6 horas.

4. las células adherentes se pueden digerir, las células suspendidas se mezclan directamente para recoger las células, 900 RPM - 1000 RPM se centrifugan durante 3 minutos y se abandonan el sobrenadante. Añadir 5 ml de células de suspensión pesada pbs, luego centrifugar 900 RPM - 1000 RPM durante 3 minutos, suspender las células con un medio fresco * de cultivo y vacunarlas en un nuevo frasco o placa de petri, colocarlas en una incubadora para su cultivo.

5. se pide a los clientes que utilicen medios de cultivo en las mismas condiciones para el cultivo celular.

6. se recomienda que los clientes tomen varias fotos de las células tres días antes de recibir las células para registrar el Estado de las células y facilitar la comunicación con nuestro Departamento técnico. Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear la visita de regreso hasta que se resuelva el problema.

7. la célula es solo para uso científico.

8. nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo * recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Después de recibir la recomendación de transmisión celular, se recomienda la transmisión 1: 2.

9. nota: la transmisión de 1: 2 es una botella t25, dos botellas t25 o dos placas de Petri de 6 cm. No una botella t25 pasa por dos placas de Petri de 10 cm.