Células estromales hepáticas de rata

Informe experimental:

I. aislamiento y cultivo:

1. en condiciones estériles, se extrae el tejido auricular de las ratas de SD de 1 - 3 días de edad, y luego se limpia este bloque de tejido dos veces con PBS para cortar el tejido en aproximadamente 1 mm3;

2. añadir 4 ml de líquido digestivo enzimático (0,1% y 0,1% colagenasa tipo i) al bloque de tejido, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, luego soplar con un gotero para hacer una suspensión unicelular, precipitar y recoger el suero naturalmente, y colocar a 4 ° C después de terminar la digestión con un medio de cultivo FBS que contiene 10%;

3. añadir 3 a 4 ml de líquido digestivo enzimático al tejido restante, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, recoger el suero superior de acuerdo con el método anterior y terminar la digestión y colocarlo a 4 ° c. repetir este paso 2 - 3 veces hasta que el tejido sea digerido;

4. filtrar el líquido digestivo celular con un tamiz de acero inoxidable de 200 mallas, centrifugar 1200r / MIN durante 10 minutos, descartar el sobrenadante, precipitar las células con suspensión de medio de cultivo que contiene 10% FBS dmem / f12, inocular en un frasco de cultivo de 25 cm 2, colocarlas a 37 ° C y cultivarlas en una incubadora de CO2 al 5%;

5. después de pegar la pared a una velocidad diferencial durante 1 hora, se succiona el medio de cultivo y se inocula en una placa de 6 agujeros para continuar el cultivo de acuerdo con las necesidades del experimento;2. identificación por inmunofluorescencia:

1. cuando los miocitos auriculares crezcan hasta el 80% de fusión, abandone el medio de cultivo, lave las células 2 veces con PBS cultivados a temperatura ambiente, 10 minutos cada vez, y luego fije las células a temperatura ambiente durante 15 minutos con poliformaldehído al 4%;

2. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego penetra la película con un 0,1% de Tritón X - 100 a 4 ° C durante 15 minutos;

3. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego cierra las células con un 4% de BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente;

4. diluir alfa - Acción un anticuerpo en una proporción de 1: 100, y luego colocarlo en un refrigerador a 4 ° C para incubar células durante la noche;

5. el PBS enjuaga las células tres veces, 10 minutos cada vez, diluye la resistencia secundaria a la alfa - Acción en una proporción de 1: 150 y las coloca durante 1 hora a 37 ° c;

6. enjuagar con PBS 3 veces, 10 minutos cada vez, observar la imagen bajo un microscopio fluorescente invertido y tomar fotos.

Perfil de la célula:

El hígado es una glándula grande en el cuerpo humano y un órgano sólido grande. Las células estromales hepáticas pertenecen a las células madre adultas y se ha encontrado que pueden diferenciarse en huesos, cartílagos, tendones, grasas, etc. La diferenciación de las células madre adultas en células musculares hace que muchos músculos sean degenerativos y genéticos con una mejor opción.

Características celulares:

1(...) El tejido proviene del tejido hepático normal de los animales de laboratorio.

2)Identificación celular:CD44La Tinción fluorescente fue positiva.

3)Las células identificadas tienen una pureza superior90%.

4)No contieneEl VIH-1,VHB,VHC, micoplasma, levadura Y.

5)Modo de crecimiento celular: fusiforme largo, células irregulares, cultivo pegado a la pared.

Medios de cultivo recomendados:

Recomendamos usarDelfoEstroma primario célula Sistema de formación Como medio de cultivo cultivado in vitro.

Precauciones:

1. después de recibir la célula, primero observe si la botella celular está intacta, si el medio de cultivo tiene fugas, turbidez y otros fenómenos, si hay los fenómenos anteriores, Póngase en contacto con nosotros a tiempo.

2. lea cuidadosamente las instrucciones de la célula para comprender la información relacionada con la célula, como la morfología celular, el medio de cultivo utilizado, la proporción de suero, las citocinas necesarias, etc., para asegurarse de que las condiciones de cultivo celular sean consistentes, y si las condiciones de cultivo son inconsistentes y causan problemas con la célula, la responsabilidad recae en el cliente.

3. limpie la superficie del vial celular con un 75% de alcohol y observe el Estado celular bajo un microscopio. Debido a problemas de transporte, es normal que algunas células formen fragmentos debido a cambios de temperatura y accidentes violentos. Después de observar el Estado celular, el 75% de la pared del vial de desinfección con alcohol colocó el vial t25 en una incubadora a 37 ° C durante 4 - 6 horas.

4. las células adherentes se pueden digerir, las células suspendidas se mezclan directamente para recoger las células, 900 RPM - 1000 RPM se centrifugan durante 3 minutos y se abandonan el sobrenadante. Añadir 5 ml de células de suspensión pesada pbs, luego centrifugar 900 RPM - 1000 RPM durante 3 minutos, suspender las células con un medio fresco * de cultivo y vacunarlas en un nuevo frasco o placa de petri, colocarlas en una incubadora para su cultivo.

5. se pide a los clientes que utilicen medios de cultivo en las mismas condiciones para el cultivo celular.

6. se recomienda que los clientes tomen varias fotos de las células tres días antes de recibir las células para registrar el Estado de las células y facilitar la comunicación con nuestro Departamento técnico. Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear la visita de regreso hasta que se resuelva el problema.

7. la célula es solo para uso científico.

8. nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo * recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Después de recibir la recomendación de transmisión celular, se recomienda la transmisión 1: 2.

9. nota: la transmisión de 1: 2 es una botella t25, dos botellas t25 o dos placas de Petri de 6 cm. No una botella t25 pasa por dos placas de Petri de 10 cm.

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