Método de sonda del virus de la hepatitis del ratón RT - PCR cuantitativo fluorescente kits de líneas celulares

[nombre del producto]Cuantificación por fluorescencia del método de sonda del virus de la hepatitis en ratones Kit RT - PCR

Nombre:Virus de la Hepatitis de Ratón (MHV) ProbegRT-PCRKit

[especificaciones de embalaje]50 veces / Caja

【Uso previsto]Virus de la hepatitis en ratones(mousehepatitis virus, mhv) es un virus ARN que se encuentra en la sangre y los órganos internos, especialmente en el hígado y los riñones, y también en el estiércol y la orina, y es altamente contagioso para los ratones jóvenes. la hepatitis Murina es una enfermedad infecciosa causada por mhv, distribuida en ratones con virus, pero en circunstancias normales la mayoría de ellos son infecciones no explícitas, que solo pueden convertirse en enfermedades mortales estimuladas por factores de estrés, principalmente hepatitis y encefalitis, por lo que la identificación rápida y precisa del virus de la hepatitis Murina juega un papel importante en la prevención y cuarentena de la enfermedad. Este producto es un kit especializado en la detección del virus de la hepatitis en ratones desarrollado a partir de la tecnología RT - PCR cuantitativa fluorescente del método de la sonda, que tiene las siguientes características:

1. está listo para abrir y usar, y el usuario solo necesita proporcionar una plantilla de ARN de muestra.

2. los primeros y las sondas están optimizados y tienen una alta sensibilidad.

3. proporcionar controles positivos para facilitar la distinción de muestras falsas negativas.

4. alta especificidad, el primer está diseñado de acuerdo con la región altamente conservadora del virus de la hepatitis en ratones y no reacciona cruzadamente con el ARN de otros virus.

5. este producto es suficiente para 50 reacciones cuantitativas de RT - PCR por fluorescencia de sonda con un sistema de 20 μl.

6. este producto solo se puede utilizar para la investigación científica.

[especificaciones e ingredientes]

【Transporte y conservación);Transporte a baja temperatura,Se conserva a - 20 ° C y el período de conservación es de 12 meses.

【Reactivos propios);muestra RNo.

Kit de RT - PCR cuantitativo fluorescente para la sonda del virus de la hepatitis en ratones[método de uso]I. muestras de la curva estándar de dilución (tomemos como ejemplo las seis diluciones de 10 veces de 10e2 - 10e6 copias / μl) debido a que la concentración del estándar es muy alta, las siguientes operaciones de dilución deben llevarse a cabo en áreas independientes y no deben contaminar la muestra ni otros ingredientes de este kit. Para aumentar la estabilidad del producto y evitar la propagación de patógenos infecciosos, este producto no proporciona muestras vivas como controles positivos, sino solo fragmentos de ADN no infecciosos como controles positivos.

1. marque 6 tubos centrífuga, 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. agregue un diluyente de plantilla especial para PCR fluorescente de 45 μl con una cabeza de pistola con núcleo (lo mejor es usar una cabeza de pistola con núcleo, el mismo a continuación).

3. añadir 5 μl1 × 10e7 copias / μl de control positivo (proporcionado por el kit) al tubo 6 y sacudir completamente durante 1 minuto para obtener una muestra de curva estándar de 1 × 10e6 copias / μl. Poner hielo para usar.

4. cambie la cabeza de la pistola, agregue un control positivo de 5 μl1 × 10e6 copias / μl en el tubo 5 (obtenido por la dilución anterior), agite completamente durante 1 minuto y obtenga una muestra de curva estándar de 1 × 10e5 copias / μl. Poner hielo para usar.

5. cambie la cabeza de la pistola, agregue un control positivo de 5 μl1 × 10e5 copias / μl en el tubo 4 (obtenido de la dilución anterior), agite completamente durante 1 minuto y obtenga una muestra de curva estándar de 1 × 10e4 copias / μl. Poner hielo para usar.

6. repita la operación anterior hasta obtener una muestra de curva estándar de 6 diluciones. Póngalo sobre Hielo.

II. muestras ARNPreparación

7. Si hay N muestras, es mejor configurar n + 2 extracciones, una más es PC (control positivo de preparación de muestras) y la otra es NC (control negativo de preparación de muestras). Se puede utilizar una dilución de 10.000 veces el control positivo de 10 μl más una cierta cantidad de agua para hacer que el volumen total sea el mismo que el volumen requerido para cada preparación como PC. Además, el agua se utiliza como nc.

8. Purificar el ARN de la muestra con un método opcional, este Kit es compatible con la mayoría de los kits de extracción de ARN viral en el mercado..

tresRespuesta probeqrt - PCR(Sistema de 20 μl, realizado en la Sala de preparación de muestras(...)

9. Si se realiza un análisis cuantitativo y solo se repite una vez, se marcan n n + 9 tubos pcr, de los cuales n + 2 se utilizan para las muestras n + 2 obtenidas en el paso anterior, 1 para el control negativo de PCR (con agua como plantilla) y 6 para la curva estándar. Si se realiza un análisis cualitativo y solo se repite una vez, se marcan n n + 4 tubos pcr, de los cuales n + 2 se utilizan para las muestras n + 2 obtenidas en el paso anterior, 1 para el control negativo de PCR (con agua como plantilla) y 1 para el control positivo de PCR (con diluyente de control positivo en El tubo 4 como plantilla). A continuación, solo se describen los pasos de la operación con análisis cuantitativos.

10. Presione la tabla en el tubo marcado para agregar los ingredientes (esta tabla solo se repite una vez. el tubo de muestra y el control negativo se establecen antes de establecer el control positivo, y la muestra de control positivo se agrega después de que todos los tubos estén tapados y almacenados)

11.Después de tapar, sube a la máquina y sigue los parámetros siguientes.qRT-PCR:

Iv: procesamiento de datos

12. si este kit se utiliza para la detección cuantitativa, se dibuja la curva estándar con el valor de registro de la concentración de control positivo como eje transversal y el valor CT como eje longitudinal. A continuación, se calcula el valor de registro de la concentración de ARN de la muestra a partir de la curva estándar con el valor CT de la muestra a medir, y luego se calcula su concentración.

13. Si este kit se utiliza para una prueba cualitativa y solo se juzga positivo o negativo, el control negativo CT debe ser superior o igual a 40. El control positivo debe tener un crecimiento logarítmico de fluorescencia, una curva de amplificación típica y un valor CT inferior o igual a 30. Las muestras analizadas serán negativas si su CT es superior o igual a 40 y positivas si son inferiores o iguales a 35. Si está entre 35 - 40, repite una vez. El valor de CT del experimento repetido es negativo si es superior o igual a 40, y positivo si es inferior a 35.