Fibrocitos humanos

¡¡ todos los productos de la compañía son solo para experimentos científicos y no se utilizan fuera de otros experimentos científicos!

Los fibrógenos del cerebro humano se separan del tejido cerebral; El cerebro está dividido en dos hemisferios izquierdo y derecho, y la corteza cerebral (materia gris) cubre la mayor parte de cada hemisferio cerebral, donde se concentra el cuerpo celular de las neuronas. El interior es la materia blanca compuesta por fibras nerviosas o mielina. Cada hemisferio tiene tres lados, el lateral exterior (aproximadamente el área de toda la corteza).1 / 3), la superficie interior y la superficie inferior (2 / 3 de la superficie); Hay muchas zanjas o grietas de diferentes profundidades en la superficie del hemisferio, y las protuberancias entre zanjas o grietas se llaman hacia atrás, lo que aumenta considerablemente la superficie del cerebro; Las fosas y fisuras importantes en el lado exterior del cerebro son las fisuras laterales del cerebro, las fisuras occipital superior y las fisuras centrales. Debido al intervalo fronterizo de la fisura de las tres zanjas, los componentes de la corteza cerebral se dividen en cuatro partes: frontal, parietal, temporal y occipital. Los Fibroblast son el principal componente celular del tejido conjuntivo suelto y se diferencian de las células mesenquimales durante el período embrionario; Los fibrocitos son más grandes, con contornos claros, en su mayoría en forma de Huso protuberante o estructura plana en forma de estrella, y sus núcleos son ovoides regulares, con núcleos grandes y obvios. Los fibrocitos tienen una fuerte actividad funcional, un citophilo débil y alcalino, con una clara actividad de síntesis y secreción de proteínas, bajo ciertas condiciones, puede lograr la transformación mutua con los fibrocitos; Los fibrocitos juegan un papel muy importante en diferentes grados de degeneración celular, necrosis y reparación de defectos tisulares. Los fibrocitos cerebrales recién aislados son redondos, bien refractivos y suspendidos en el medio de cultivo. Las células se adhieren a la pared durante 30 minutos, y algunas de ellas comienzan a extender los pies falsos, mostrando pequeñas protuberancias; Después de 6 horas, las células se adhirieron básicamente a la pared y se extendieron en forma de fusiforme, con núcleos celulares claros, distribución relativamente uniforme, dispersos en el crecimiento y sin aglomeraciones; Las células crecen rápidamente, en un Estado de fusión a los 5 - 7 días, las células están bien dispuestas, algunas crecen cruzadas y superpuestas, planas, celulares más grandes, el Citosol es transparente, el núcleo es más grande, ovalado y el color es ligero. Las células se fusionan y se conectan entre sí en una red; Las células se distribuyen en forma de Huso protuberante o en forma de estrella plana.
Introducción al método:

Las fibras del cerebro humano separadas por el laboratorio de la empresa se utilizan¿La digestión mixta de la proteasa Yi - colagenasa se prepara mediante el método de adherencia diferencial a la pared, ¿ el número total de células es de aproximadamente 5 × 10? Cells / botella.
Pruebas de calidad:

El cerebro humano fibrogénico aislado por el laboratorio de la empresaLa identificación de inmunofluorescencia de vicentin puede alcanzar una pureza superior al 90% y no contiene VIH - 1, hepatitis b, hepatitis c, micoplasma, bacterias, levadura y hongos.

Medio de cultivo IncluyendoFBS、 Aditivos para el crecimiento, pencilina, streptomicina, etc.

Frecuencia de cambio de líquido CadaCambio de líquido una vez cada 2 - 3 días

Características de crecimiento Pegar a la pared

Morfología celular Tipo de Fibroblasto

Características generacionales Se puede transmitirAlrededor de 5 generaciones; Estado dentro de la tercera generación

Líquido digestivo 0,25% proteasa Yi

Condiciones de cultivo Fase gaseosa: aire,95%； CO2, 5%

Preparativos

1. preparación de equipos experimentales: preparación de placas de Petri estériles, botellas de cultivo, pipetas, tubos centrífuga, instrumentos quirúrgicos, etc., y esterilización a alta presión u otros tratamientos de desinfección adecuados.

2. preparación de reactivos: preparar o comprar medios de cultivo adecuados, enzimas digestivas (por ejemplo, colagenasa, etc.), suero bovino fetal, doble anticuerpo, etc., para garantizar que sea estéril y durante la vida útil.

3. preparación del animal experimental o del origen del tejido: seleccionar el animal adecuado y realizar la anestesia o ejecución correspondiente de acuerdo con las necesidades del experimento para obtener el tejido necesario; O obtener la Organización de una base de datos de muestras de organización existente.

Extracción y tratamiento de materiales

1. extracción de materiales: en condiciones estériles, extraer rápidamente el tejido objetivo, minimizar el daño al tejido y eliminar el exceso de grasa, tejido conjuntivo y otros tejidos no objetivo.

2. limpieza: lavar el tejido extraído varias veces con un PBS estéril preconfriado para eliminar la sangre y las impurezas.

3. corte: Corte el tejido en trozos pequeños de aproximadamente 1 - 2 mm3 para su posterior digestión.

Aislamiento celular

1. digestión: coloque los bloques de tejido cortados en un tubo centrífuga que contenga una cantidad adecuada de enzimas digestivas y digiera en un sacudidor a temperatura constante de 37 ° c o en una incubadora durante un período de tiempo. Durante este período, el tubo centrífuga se puede sacudir suavemente para hacer que la digestión sea más uniforme.

2. terminar la digestión: cuando la mayor parte de los bloques de tejido se digieren en suspensión unicelular o pequeñas masas celulares, se añade un medio que contiene suero para terminar la digestión.

3. filtración y centrifugación: filtrar la suspensión celular con un tamiz celular, eliminar los fragmentos de tejido no digeridos y luego centrifugar el filtrado a la velocidad adecuada para recoger la precipitación celular.

Observación y detección celular

1. observación diaria: observar la morfología, el Estado de crecimiento, la densidad de las células con un microscopio invertido todos los días, registrar los cambios en las células, si se encuentra contaminación celular o anomalías, tomar las medidas correspondientes a tiempo.
2. recuento celular y detección de vitalidad: cuando sea necesario, las células se pueden contar y detectar de vitalidad mediante métodos como la tinción azul de esperanza para comprender el crecimiento celular y el Estado de salud.

I. extracción y separación de materiales

1. operación rápida

Los tejidos deben tratarse inmediatamente después de la extracción para evitar la exposición prolongada a la temperatura ambiente o a entornos no nutritivos.

Lavar los tejidos con PBS estériles o solución salina normal para eliminar la sangre y las impurezas.

2. selección de enzimas digestivas

- selección de enzimas digestivas en función del tipo de tejido para evitar el daño celular causado por la sobredigestión.

El tiempo de digestión debe controlarse estrictamente (generalmente 10 - 30 minutos) y el Estado de desconexión celular se puede observar mediante un microscopio.

II. optimización de las condiciones de cultivo

1. selección de medios de cultivo

- utilizar medios que contengan suero o factores de crecimiento específicos (como dmem, rpmi 1640, etc.), algunas células deben agregar insulina, egf, etc.

Evitar cambios frecuentes de marcas o lotes de medios de cultivo y reducir el estrés de adaptación celular.

2. pegarse a la pared y pasar de generación en generación

- las células primarias tienen una capacidad débil para adherirse a la pared y pueden necesitar ser envueltas en placas de Petri (como colágeno, polilisina).

- se recomienda controlar la densidad entre el 70% y el 80% durante el paso, y la confluencia excesiva puede conducir a la inhibición y diferenciación del contacto.

III. control de la contaminación

1. operación estéril

Operar todo el proceso en la Mesa súper limpia, utilizando consumibles desechables para evitar la contaminación cruzada.

- se puede añadir doble resistencia al medio de cultivo, pero el uso a largo plazo puede afectar la actividad celular.

2. detección de micoplasma

Detectar regularmente la contaminación por micoplasma (como el método pcr) y descartar las células a tiempo después de la contaminación.

IV. vigilancia del Estado

1. observación diaria

- Revisar diariamente la morfología celular, la densidad y el color del medio de cultivo y cambiar el medio de cultivo a tiempo (generalmente cada 2 - 3 días).

La morfología anormal (como redondeo celular y aumento de fragmentos) puede indicar contaminación o desnutrición.

2. transmisión y almacenamiento congelado

El número de divisiones celulares primarias es limitado (generalmente de 5 a 10 generaciones), y es necesario congelar las células secundarias tempranas a tiempo.

- se recomienda el uso de suero Dmso + (o medio especial de criopreservación) para el liofilizado, que se conserva con nitrógeno líquido después de enfriarse por gradiente.