Medio de cultivo especial para fibroblastos tímicos primarios de ratas

Descripción del producto:

Optimizado cuidadosamente por el equipo, después de pruebas a largo plazo, este producto puede mantener un buen estado de crecimiento de los timocitos primarios de las ratas.

Este producto ya contiene varios ingredientes necesarios para el crecimiento de los timocitos primarios de las ratas, sin agregar ningún ingrediente, se puede cultivar directamente con los timocitos primarios de las ratas.

Los principales ingredientes del producto

Transporte y conservación

Transporte:Transporte a temperatura media y baja en una caja térmica que contiene bolsas de hielo biológicas

保存方法: conservar durante 12 meses de acuerdo con las condiciones de conservación correspondientes, el medio de cultivo configurado es de 2 ° C a 8 ° c, y conservar durante 2 meses;

control de calidad

Precauciones:

Solo para investigación científica.

Algunos de los componentes del sistema de cultivo son sustancias nocivas para la salud humana. no toque el interior del recipiente con el líquido del sistema de cultivo y el líquido residual del sistema de cultivo con la piel expuesta; La concentración y la nocividad de esta parte de las sustancias nocivas son bajas, y en caso de contacto, se puede lavar inmediatamente con agua del grifo.

Pasos de cultivo celular:

I. preparación de los medios de cultivo y las condiciones de congelación del cultivo:

1) preparar el medio de cultivo dmem - H (añadir NaHCO3 1,5g / l), 90%; Suero bovino fetal, 10%. También se puede seleccionar un medio de suspensión de acuerdo con las necesidades del experimento para que las células T 293 crezcan en suspensión.

2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

3) liofilizado: 90% medio de cultivo, 10% dmso, listo para usar. Almacenamiento de nitrógeno líquido.

II. tratamiento celular:

1) células de reanimación: agitar y descongelar rápidamente el criodepósito que contiene 1 ml de suspensión celular en un baño de agua a 37 ° c, añadir 4 ml de medio de cultivo y mezclar uniformemente. Centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. A continuación, se añaden todas las suspensiones celulares al frasco de cultivo durante la noche (o se añade la suspensión celular a una placa de Petri de 10 cm, se añaden unos 8 ml del medio de cultivo y se cultiva durante la noche). Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

Para las células adherentes, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 2 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) en el frasco de cultivo, colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos, y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones, golpear ligeramente el frasco de cultivo y añadir una pequeña cantidad de medio de cultivo para terminar la digestión.

3. presione 6 - 8 ml / botella para complementar el medio de cultivo, revuelva suavemente y exprima, centrifuga durante 4 minutos en condiciones de 1000rpm, abandone el sobrenadante, agregue 1 - 2ml de medio de cultivo y sople bien.

4. dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.

3) Criopreservación celular: cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Cuando las células adheridas se congelan, se agrega una pequeña cantidad después de descartar el medio de cultivo. después de que las células se redondean y se desprenden, se agregan unos 1 ml de medio de cultivo que contiene suero y se agregan al criopreservación. después de agregar un 10% de dmso, se congela.

¿¿ el método de Criopreservación de las células?

Método de congelación y conservación 1: el tubo de congelación se coloca a 4 ° C durante 30 a 60 minutos → (- 20 ° C durante 30 minutos *) → - 80 ° C durante 16 a 18 horas (o durante la noche) → almacenamiento a largo plazo de vaporphase en tanque de nitrógeno líquido.

Método de congelación y conservación 2: el tubo de congelación se coloca en una máquina de enfriamiento programable con un programa establecido para bajar de 1 - 3 ° C a menos de - 80 ° C por minuto, y luego se coloca en un tanque de nitrógeno líquido vaper fase para su almacenamiento a largo plazo. No más de una hora a - 20 ° C para evitar que los cristales de hielo sean demasiado grandes y causen una gran cantidad de muertes celulares, también se puede saltar este paso y ponerlo directamente en el refrigerador a - 80 ° c, pero la tasa de supervivencia se reduce ligeramente.

Productos que la compañía está vendiendo:

1) calentar el medio de cultivo en una olla de baño de agua a 37 ° c; Prepare un tubo centrífuga estéril de 15 ML y agregue 8 ml de medio de cultivo precalentado.

2) retire las células congeladas del tanque de nitrógeno líquido y póngalo rápidamente en una olla de baño de agua a 37 ° C para volver a calentarse (se puede preparar un vaso de precipitados limpio, llene el agua a 37 ° c, y después de extraer el criodepósito celular, póngalo rápidamente en el vaso de precipitados y luego transfirirlo gradualmente a la olla de baño de agua). Sacudir suavemente el criodepósito para que las células puedan descongelarse en 1 a 2 minutos, para que las células puedan pasar por el segmento de temperatura vulnerable (- 5 a 0 ° c) lo antes posible. Preste atención a que la boca del tubo de almacenamiento congelado no puede sumergirse en el agua para evitar la contaminación.

3) limpiar el criodepósito con un 75% de alcohol antes de colocarlo en una mesa ultralimpia, transferir las células del tubo al tubo centrífuga preparado y soplar suavemente el líquido para que las células se dispersen uniformemente, reducir la concentración de Dmso y evitar burbujas al soplar. Lavar la pared del tubo con un medio de cultivo fresco dos veces y transferirlo al tubo centrífuga.

4) centrifugar 800rpm durante 5 minutos, descartar el líquido superior, añadir un medio de cultivo fresco y soplar para hacer una suspensión celular.

5) transferir la suspensión celular al vial de células t25, añadir una cantidad adecuada de medio de cultivo, sacudir suavemente el vial de células para que las células se distribuyan uniformemente y colocarlo en una caja de temperatura para cultivarlo.

6) observar el crecimiento de las células adheridas a la pared al día siguiente y cambiar el medio de cultivo fresco para eliminar las células muertas. Continuar el cultivo y transmitirlo normalmente cuando las células crezcan hasta que se fusionen entre el 80% y el 90%. Por lo general, las células recién recuperadas necesitan pasar por 2 a 3 generaciones, y la vitalidad celular se recupera antes de que se puedan realizar experimentos posteriores.