Proteína recombinante del factor de demanda humana de alta temperatura A1 (htra1)

Factor de demanda humana de alta temperaturaProteína recombinante A1 (htra1)

Nombre del producto: factor de demanda de alta temperaturaProteína recombinante A1 (htra1)

Nombre en inglés:Factor de Requisitos de Alta Temperatura Recombinante A1 (HTRA1)

HtrA; L56; ORF480; PRSS11; HtrA serina peptidasa 1; Proteasa, serina, 11; IGFBP5-Proteasa; Requisito de alta temperatura A serina peptidasa 1

Modelo:CS-D003

Enzimas y quinasas

Especies:Homo sapiens (hombre, hombre)

Fuente: expresión procariótica

HuéspedesE. coli

Niveles de lps:< 1,0 EU / μg (determinado por el método lal)

Localización subcelular:: secreción, Citosol

Peso molecular previsto:47.2kDa

Peso molecular real:47kda (para el análisis de diferencias, consulte las instrucciones)

Fragmentos y etiquetas:Gly204~Leu364 con N-terminal His y GST Tag

Composición del amortiguador:20mm tris, amortiguador NaCl de 150 mm (ph 8.0, que contiene 1 mm edta, 1 mm dtt, 0,01% skl, 5% trehalose y proclin300)

Características: polvo liofilizado

Pureza:> 90%

Punto isoeléctrico:6.6

Aplicaciones:Control Positivo; Inmunógeno; SDS-PAGE; WB.

Especificaciones:10μg50μg200μg1mg5mg

1. extracción de proteínas tisulares

1) equipo necesario: máquina de hielo, bolígrafo de marcado, dos juegos de tubos EP de 1,5 ML (tratamiento de alta temperatura y alta presión), una gran caja de hielo, una caja de tubos EP de 1,5 ml, guantes, tijeras oftalmológicas (tratamiento de alta temperatura y alta presión), tejido fresco o conservado en el tejido del refrigerador de - 80 ° c, PBS (tratamiento de alta temperatura y alta presión), pipeta, cabeza de succión (tratamiento de alta temperatura y alta presión), dos juegos de barras de molienda (tratamiento de alta temperatura y alta presión), centrifugadora de palma, papel de filtro, lisado de tres descontaminación, ácido benzometilsulfónico (pmsf, un inhibidor de proteasa, altamente tóxico), centrifugadora, vaso de precipitador, muestra de gel de 2 × sds, disulfuración (disulfirato de disulfirato de disulfirato dtt), oscilador, placa de espuma.

A. hielo de mecanismo de fabricación de hielo;

B. la pluma de marcado marca los dos juegos de tubos ep;

C. coloque la Caja de hielo grande y la Caja de tubo EP sobre hielo, un conjunto de tubos EP marcados con bolígrafos de marcado en la Caja de hielo grande, y otro conjunto de tubos EP marcados con bolígrafos de marcado en la Caja de tubo ep, use guantes, traiga la Caja de tubo ep, Corte Oftalmológico de tejido fresco del tamaño de soja (unos 100 mg) o guarde en el tejido del refrigerador - 80 ° c;

D. retire el PBS conservado en el refrigerador a 4 ° c, agregue 1 ml de PBS al tubo ep, Corte oftalmológico y Corte de tejido (acción rápida), centrifugación en la palma de la mano, abandone la parte superior del líquido, luego agregue 1 ml de PBS al tubo ep, molienda de la barra de molienda, centrifugación a 3000 RPM durante 10 minutos, abandone La parte superior del líquido, papel filtrante absorba el líquido residual del tubo lo más seco posible, estime el volumen de sedimentos en el tubo ep, los pasos anteriores se operan sobre hielo tanto como sea posible;

E. extraer tres lisas de descontaminación del refrigerador de 4 ° c, extraer pmsf del refrigerador de - 20 ° C y colocarlo en una gran caja de hielo, gotear 3 - 5 veces el volumen de lisado de descontaminación en el tubo EP (generalmente 5 veces), luego agregar pmsf (la proporción de los dos es de 94: 6), moler la barra de molienda (craqueo completo en hielo de 20 - 30 minutos), los pasos anteriores deben llevarse a cabo;

F. preconfriamiento de la centrifugadora, centrifugando el líquido tisular completamente agrietado a 4 ° C y 10000 RPM durante 10 minutos;

G. lavar el vaso de precipitados con agua del grifo, verterlo en agua al vapor y hervirlo en la estufa eléctrica;

H. prepare el tampón de muestra de gel 2 × SDS (almacenado a temperatura ambiente), retire el dtt conservado en el refrigerador a - 20 ° c, Póngalo en una caja de hielo grande, absorba cuantitativamente el sobrenadante después de la centrifugación en otro conjunto de tubos EP con una pistola de pipeta (no absorba el sedimento inferior), Presione el sobrenadante: 2 × sds: dtt = 1: 0,8: 0,2 más 2 × SDS y dtt, centrífuga en la palma de la mano, luego introduzca cuidadosamente el tubo EP en la placa de espuma y póngalo en el vaso de precipitados hervido durante 6 - 8 minutos (la potencia del horno eléctrico no debe ajustarse demasiado para evitar que la tapa del tubo explote);

I. retire la placa de espuma con pinzas, colócela en una caja de hielo grande durante 10 minutos, centrifuga la palma de la mano y Colócala en un refrigerador a - 20 ° C para su uso posterior.

Nota: el lisado también puede elegir un lisado de descontaminación única o un lisado celular según corresponda.

2. extracción de proteínas celulares adherentes (el contenido de proteínas celulares es generalmente de aproximadamente 1x10 - 9 mg / célula)

1) equipo necesario: máquina de hielo, espátula celular, pluma de marcado, dos juegos de tubos EP de 1,5 ML (tratamiento a alta temperatura y alta presión), dos grandes cajas de hielo, guantes, botellas de cultivo llenas de células, PBS conservados en refrigeradores a 4 ° c, lisado de tres descontaminaciones, fluorobenzilsulfonato (pmsf, un inhibidor de la proteasa, altamente tóxico, pipeta, aspiradora (tratamiento a alta temperatura y alta presión), papel filtro, centrifugadora, vaso de precipitados, tampón de muestra en gel 4 × sds, disulfitol (dtt), placa de espuma.