Kit de detección de proliferación celular Cell Counting Kit - 8

Kit de proliferación celular Cell Counting Kit - 8 (cck - 8)

Número de producto: 6005m

Especificaciones del producto: 500t

Condiciones de almacenamiento:4℃Conservar protegido de la luz, almacenar durante mucho tiempo en-20℃，La fecha de caducidad se ve en el embalaje exterior..

Introducción del producto:

Kit de conteo de células-8AbreviaturaCCK8(oWST-8) kit, es unWST-8(nombre químico:2- (2 -Grupo metoxi- 4 -Nitrobenceno) - 3 - (4 -Nitrobenceno) - 5 - (2,4 -Disulfonbenceno-2H-La reacción de color de la sal monosódica de tetrazol es ampliamente utilizada en kits de detección rápidos y de alta sensibilidad para la proliferación celular y la citotoxicidad.

WST-8Principio de funcionamiento: en presencia de reactivos de acoplamiento electrónico, se puede reducir por la deshidrogenasa en las mitocondrias para producir un producto naranja - Amarillo altamente soluble en agua.formazán). La profundidad del color es directamente proporcional a la proliferación celular y inversamente proporcional a la citotoxicidad. Utilizando el medidor de etiquetado enzimático en450 nmDeterminación a la longitud de ondaODValor, que refleja indirectamente el número de células vivas.

WST-8SíMTTUn producto alternativo actualizado, yMTTU otrosMTTProductos similares comoXTT,MTSEn comparación con otros, tiene ventajas obvias. En primer lugar,MTTLa armadura producida por la reducción de algunas deshidrogenasas en las mitocondrias no es soluble en agua y necesita una disolución específica para disolverse; YWST-8,XTTYMTSLos a producidos son solubles en agua, lo que puede ahorrar los pasos de disolución posteriores. En segundo lugar,WST-8La relación a generadaXTTYMTSEl Naan producido se disuelve más fácilmente. Una vez más,WST-8ComparaciónXTTYMTSMás estable, haciendo que los resultados experimentales sean más estables. Además,WST-8ConMTT,XTTEs más amplio y más sensible que el rango lineal.

CCKEl método se utiliza ampliamente en la detección de medicamentos, la determinación de la proliferación celular, la determinación de la citotoxicidad, las pruebas de sensibilidad a los medicamentos oncológicos y la detección de la actividad de los factores biológicos.

Método de uso:

1. detección de la actividad celular

（1) en96 Inoculación de suspensión celular en la placa de foramen100 μL/Agujero), se recomienda que se pueda establecer8 Gradiente de concentración de células individuales, establecido por cada concentración6 Pavimentación celular repetida, por ejemplo, según el número de células0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 células/96La placa del agujero se pavimenta. Coloque la placa de cultivo en una incubadora y cultive durante la noche..37℃,5% de CO2).

（2) añadir a cada agujero10 μL de CCKSolución (tenga cuidado de no generar burbujas en el agujero, pueden afectarODLectura del valor). Nota: si el producto se precipita, se puede37℃El tratamiento con baño de agua no afecta al uso.

（3) incubar la placa de cultivo en la incubadora0,5 - 4 horas. nota: el primer experimento puede ser en0.5、1、2 Y4 horasDespués de eso, se detecta con un medidor de estándar enzimático, y luego se selecciona un punto de tiempo con un rango de absorción más adecuado para experimentos posteriores.

（4(determinado con un medidor de enzima en450 nmY600 nmAbsorción en (eliminar la interferencia del Fondo de la placa de agujero). ()5) Si no se determina por el momentoODValores que se pueden agregar a cada agujero10 μL 0,1 MDeHClSolución o1% p/v SDSSolución y conservar la placa de cultivo a temperatura ambiente para evitar la luz.24 horasDeterminación interna, la absorción no cambiará.

2. proliferación celular - detección de toxicidad

（1) en96 Vacunación en el tablero de agujeros100 μLSuspensión celular, se recomienda que se pueda establecer8 Gradiente de concentración de células individuales, establecido por cada concentración6 Pavimentación celular repetida, por ejemplo, según el número de células0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 células/96La placa del agujero se pavimenta. Coloque la placa de cultivo en una incubadora y cultive durante la noche..37℃, 5%CO2(...)

（2) añadir a la placa de cultivo1 - 10 μLEstimulación farmacológica específica.

（3) incubar en una incubadora durante un período de tiempo (por ejemplo:6、12、24 O48 horas).

（4) añadir a cada agujero10 μL de CCKSolución (tenga cuidado de no generar burbujas en el agujero, pueden afectarODLectura del valor). Nota: si el producto se precipita, se puede37℃El tratamiento con baño de agua no afecta al uso.

（5) incubar la placa de cultivo en la incubadora0,5 – 4 horas. nota: el primer experimento puede ser en0.5、1、2 Y4 horasDespués de eso, se detecta con un medidor de estándar enzimático, y luego se selecciona un punto de tiempo con un rango de absorción más adecuado para experimentos posteriores.

（6(determinado con un medidor de enzima en450 nmY600 nmAbsorción en (eliminar la interferencia del Fondo de la placa de agujero).

（7) Si no se determina por el momentoODValores que se pueden agregar a cada agujero10 μL 0,1 MDeHClSolución o1% p/v SDSSolución y cubrir la placa de cultivo para evitar la luz y conservarla a temperatura ambiente.24 horasDeterminación interna, la absorción no cambiará.

Nota: si la sustancia a medir es oxidativa o reductora, se puede agregarCCKAnteriormente, se cambió el medio fresco (se eliminó el Medio y se lavó la célula dos veces con el medio, y luego se agregó el nuevo medio para eliminar la influencia del medicamento. Por supuesto, cuando el impacto del medicamento es relativamente pequeño, se puede deducir directamente la absorción en blanco después de agregar el medicamento en el medio de cultivo sin cambiar el medio de cultivo.

3. fórmula de cálculo

Tasa de supervivencia celular=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]xTasa de inhibición=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]xComo:Agujero experimental(Medios de cultivo que contienen células,CCK-8, medicamentos a probar(...)AbsorciónAc:Agujero de control(Medios de cultivo que contienen células,CCK-8, no hay medicamentos por probar(...)AbsorciónAb:Agujero en blanco(Medios de cultivo sin células y medicamentos a probar,CCK-8)Absorción

Precauciones

1. Antes de usarlo, centrifugar instantáneamente el producto hasta el Fondo del tubo antes de realizar experimentos posteriores.

2. usar96Los poros se pavimentan celulares, si el tiempo de cultivo es más largo, se debe prestar atención al problema de la evaporación. Se recomienda abandonar el método del círculo circundante y agregar la misma cantidad.PBS, agua o medio de cultivo.

3. Antes de probar con un medidor de enzima, es necesario asegurarse de que no hay burbujas de aire en cada agujero, de lo contrario interferirá con la determinación.

4. Este producto se limita a la investigación científica, no se puede utilizar para diagnóstico clínico o tratamiento, no se puede utilizar para alimentos o medicamentos, y no se puede almacenar en viviendas ordinarias.

5. Para su seguridad y salud, Use ropa experimental y guantes desechables.