Afdye 555 Tinción de células Ester del NHS

AFDye 555 éster NHS

(Equivalente de éster de Alexa Fluor 555 NHS)

Información del producto

Descripción del producto

Afdye 555 es un tinte soluble en agua y fuertemente fotoestable, con una producción de cuánticos de luz muy alta. Afdye 555 es un tinte fluorescente naranja que se puede estimular con líneas láser de 488 nm o 532 nm. Es una alternativa a cy3 o tetrametilrodamina y tiene una mejor estabilidad luminosa que cy3 en células vivas y fijas. Fuerte tolerancia en el rango de pH 4 - 10.

Afdye555 NHS Ester (equivalent to Alexa Flower 555 NHS ester) es un colorante que reacciona con aminas, emite fluorescencia naranja y suele marcar proteínas o anticuerpos, polipéptidos, oligonucleótidos modificados por grupos aminérgicos y otras biomoléculas que contienen grupos aminérgicos a través de Aminas primarias. Esta marca suele ser efectiva en el rango de pH 7 - 9 zui, formando un enlace amido estable y covalente.

Características del producto

Métodos de conservación y transporte

Conservación: - 20 ° C conservación seca a la luz, efectiva durante 2 años.

Transporte: transporte de bolsas de Hielo.

Precauciones

1) los tintes fluorescentes tienen problemas de enfriamiento, por favor, preste atención a evitar la luz en la medida de lo posible para ralentizar el enfriamiento fluorescente.

2) aunque los tintes de la serie afdye NHS Ester tienen cierta solubilidad en agua, se recomienda encarecidamente disolver Dmso y DMF para preparar el líquido madre antes de realizar experimentos de marcado posteriores. Porque estos grupos reactivos en sistemas solubles en agua son muy fáciles de hidrolizar para formar formas no reactivas de ácido libre.

3) para su seguridad y salud, Use ropa experimental y guantes desechables.

I. pasos de teñido (tomando como ejemplo la marca de IgG de inmunoglobulina)

Casi todas las proteínas o polipéptidos se pueden etiquetar con reactivos de reacción de Amina (sondas). Los siguientes son los pasos de etiquetado optimizados para anticuerpos igg, los usuarios pueden ampliar o reducir el sistema de reacción en función de su propia cantidad de proteínas, pero para obtener los resultados deseados de teñido, la concentración de proteínas no debe ser inferior a 2 mg / ML. Debido a las grandes diferencias en la posición de la superficie de los grupos aminérgicos y los grupos aminérgicos contenidos en diferentes proteínas (polipéptidos), se recomienda que los usuarios establezcan tres grupos diferentes de reactivos de reacción aminérgica en el primer experimento: la relación mole de la proteína para seleccionar la relación Mole que puede lograr la eficiencia del etiquetado zuijia.

1,1 disuelve completamente la proteína a 10 mg en 1 ml de tampón de hidrógeno y sodio de 0,1 m de carbono.

Nota ①: la concentración de proteínas suele ser de 5 - 20 mg / ml, y la tasa de éxito del acoplamiento es altamente dependiente de la concentración de proteínas. Cuando la concentración es inferior a 2 mg / ml, afectará seriamente la eficiencia del marcado.

Nota ②: el sistema de etiquetado debe evitar cualquier sustrato que contenga aminas, como tris, glicina, sales de amonio u otras proteínas estables como la bsa, como la contaminación de las soluciones proteicas a marcar que contengan las sustancias mencionadas, debe diálisis en un tampón fosfórico (pbs) de 10 - 20 mm, y luego agregar 0,1 ml de tampón de bicarbonato de 1m (ph 8,3 - 9,0) a cada ml de solución proteica al pH requerido.

Nota ③: las bajas concentraciones de Azida de sodio (≥ 3 mm) o dispersión de azufre y mercurio (≥ 1 mm) presentes en la solución de anticuerpos no interfieren con la reacción de etiquetado.

1.2 disolver el reactivo de reacción de Amina (sonda) con DMF anhidro de alta calidad o Dmso (por ejemplo: afdye555 NHS ester) a 10 mg / ML.

Nota ①: la solución acuosa de afdye 488 NHS Ester debe estar disponible y no se puede conservar, ya que en la solución acuosa se hidrolizará en ácido libre inactivo. El líquido de almacenamiento Dmso de afdye 488 NHS Ester se puede conservar a ≤ - 20 ° C y se recomienda agotarlo en 2 semanas.

1.3 añadir lentamente un reactivo de reacción de Amina de 50 - 100 μl (sonda) mientras se agita o gira la solución proteica.

Nota ①: la cantidad de reactivos de reacción de Amina (sondas) añadidos es de 0,5 - 1 mg. en general, unos reactivos de reacción de Amina de 1 / 4 - 1 / 3 se acoplarán a la proteína. Diferentes proteínas y reactivos de marcado tienen diferentes efectos de etiquetado, por favor optimice la proporción de los dos de acuerdo con las circunstancias específicas.

1.4 mezclar lentamente a temperatura ambiente para evitar la luz e incubar durante 1 h (o más).

1.5 [opcional] terminar la reacción añadiendo 0,1 ml de hidroxiamina 1,5 m (ph 8,5) recién preparada e incubar el sistema que contiene hidroxiamina a temperatura ambiente durante 1 hora.

1.6 purificación: elija una forma adecuada (por ejemplo: método de diálisis, columna P - 30 o columna PD - 10) para purificar el producto marcado, eliminando iones de sal o reactivos de reacción de Amina no reaccionados.

1.7 almacenamiento: la proteína marcada se conserva a 2 - 8 ° C para evitar la luz. Si la concentración de acoplamiento de proteínas purificada es inferior a 1 mg / ml, agregue BSA u otras proteínas estables 1 - 10 mg / ML. En presencia de Azida de sodio de 2 mm, se puede conservar a 2 - 8 ° C durante varios meses. Si se necesita conservar durante más tiempo, se debe conservar a - 20 ° C para evitar la luz después del embalaje, evitando la congelación y el deshielo repetidos.

II. cálculo de la proporción de marcas (valor f / p)

Para la mayoría de los anticuerpos, como la inmunoglobulina igg, el coeficiente de absorción molecular es de 203000, y el valor f / P entre 4 y 9 es el más adecuado.
2.1 cálculo del valor f / P de la proteína marcada por fdye555:
1) diluir la cuantificación de un poco de proteína de acoplamiento purificada con un múltiplo preciso de PBS y determinar la absorción de luz a 280 nm y 555 nm en una placa de Petri de 1 cm;
2) calcular la concentración de proteínas en la muestra: concentración de moles de proteínas = (a280 ((a555 × 0,08) × múltiplo de dilución / 203000
3) calcular la proporción de etiquetado: número de moles de tinte Unidos por mole de proteína = a555 × múltiplo de dilución / (150.000 × concentración de moles de proteína)

Productos relacionados

- - written / edited by V. shallan [los derechos de autor pertenecen a mkbio maokang]

Shanghai maokang Biotechnology co., Ltd. es un servicio de reactivos, instrumentos y consumibles de laboratorio y experimentos involucrado en la investigación en las ciencias de la vida y la biotecnología, que se dedica principalmente a la biología celular, botánica, biología molecular, inmunología, bioquímica y proteómica. Campos como la investigación y el desarrollo y producción de biofarmacéuticos y reactivos de diagnóstico. La compañía se adhiere al concepto de negocio de "orientado a las personas, honesto y confiable en el contrato". Adherirse al principio de "garantía de calidad" para proporcionar productos de alta calidad a la mayoría de los clientes.