293 hek - 293 (células renales embrionarias humanas)

293 hek - 293 (células renales embrionarias humanas)

AliasHeck 293; Hek - 293; He 293; He: 293; 293; 293 hectáreas; Riñón embrionario humano 293

Esquema de formación a (predeterminado)

Medio de crecimiento:

MEM (mejora atcc) + 10% FBS + 1% P / s

Condiciones de cultivo:

Fase gaseosa: aire, 95%; CO2， 5%, temperatura: 37 ° C

PrecaucionesLa célula se adhiere a la pared suelta, por favor, trate de ser lo más suave posible al operar; Es necesario precalentar el medio de cultivo al cambiar el líquido; Si hay grandes masas celulares caídas en la recepción, como es normal, por favor, trate de acuerdo con las precauciones de recepción.

Referencias (documentación de origen)

La descripción de fondo es una célula inmortalizada formada por células renales embrionarias humanas transferidas por Adenovirus humano 5 (ad5) cortado, que contiene y expresa el gen ad5 transferido. Los primeros informes señalan que el genoma contiene ADN del extremo izquierdo y derecho del genoma del Adenovirus 5 (ad5), pero ahora está claro que solo existe ADN de su extremo izquierdo. Después de la clonación y secuenciación del punto de inserción de ad5, se encontró que los nucleótidos lineales de 1 - 4344 dígitos de ad5 se integraron en el cromosoma 19 (19q13.2). Es un huésped amplificado por un vector de Adenovirus humano, un receptor de superficie celular que puede expresar la proteína de la vitrina anormal, compuesto por la subunidad integrina Beta 1 y la subunidad alfa - V del receptor de la vitrina.

Edad (sexo)Feto

Fuentes organizativasRiñón; Transformación con ADN 5dna de Adenovirus

Tipo de célulaLíneas celulares transformadas

Nivel de bioseguridadBSL-2

Tiempo de duplicación~ 24-30 horas

TumoralSí, forma tumores en ratones desnudos.

Expresión del receptorvitronectina

Agencia de conservaciónATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602

Tratamiento celular:

1) reanimación de las células liofilizadas: agitar y descongelar rápidamente el tubo liofilizado que contiene 1 ml de suspensión celular en un baño de agua a 37 ° C y añadir al tubo centrífuga que contiene 4 - 6 ml de medio de cultivo para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y suspender las células en el medio de cultivo. A continuación, la suspensión celular se agregó al frasco de cultivo (o placa de petri) que contenía 6 - 8 ml de medio de cultivo para cultivar a 37 ° C durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 70% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión. La célula es una célula suspendida y ligeramente adherida a la pared, y la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

1. recogida: recoger las células suspendidas del frasco de cultivo en un tubo centrífuga. Lavar las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio. Debido a que las células no se adhieren firmemente a la pared, las células se caerán después de humedecer el pbs, por lo que el PBS también debe reciclarse en el tubo centrífuga.

2. añadir 0,25% (w / v) 0,53 mm EDTA al matraz de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml) en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se desprenden rápidamente y se recuperan de la Mesa de operaciones, añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo que contiene 10% FBS después de golpear ligeramente el matraz para terminar la digestión.

3. centrifugar las células suspendidas recogidas, las células en el limpiador de PBS y las células adherentes digeridas durante 5 minutos a 1000 rpml, descartar el sobrenadante, complementar el medio de cultivo de 1 - 2 ML y volver a suspender y mezclar bien, dividir la suspensión celular en el nuevo frasco t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y continuar la transmisión en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25:

1. al congelar las células, se recogen las células digeridas en el tubo centrífuga de acuerdo con el proceso de transmisión celular, y se puede contar con una placa de recuento de sangre para determinar la densidad de congelación de las células. La densidad de Criopreservación recomendada de las células generales es de 1 × 10 ⁶ a 1 × 10 ⁷ células vivas / ML.

2. centrifugar 1000 RPM durante 3 - 5 min y eliminar el sobrenadante. Las células se resuelven con el liofilizado celular preparado y se asignan a un liofilizado de acuerdo con el contenido de 1 × 10 ⁶ a 1 × 10 ⁷ células vivas / ML por cada 1 ml de liofilizado, marcando el nombre, el álgebra, la fecha y otra información.

3. coloque las células que se van a congelar en la Caja de enfriamiento del programa, pase la noche en el refrigerador de - 80 grados y luego pase al recipiente de nitrógeno líquido para su almacenamiento. Al mismo tiempo, se registra la ubicación del congelador en el contenedor de nitrógeno líquido para su posterior consulta y uso.

Pasos de operación:

Paso 1: retire el liofilizado no programático sin suero del refrigerador, listo para usar

Paso 2: recolección centrífuga de células en crecimiento logarítmico (las células adherentes se digieren y centrifugan, las células suspendidas se centrifugan directamente, la velocidad de rotación es de 1200 rpm o 250g, el tiempo es de 3 minutos)

Paso 3: descartar la shangqing, añadir una cantidad adecuada de Criopreservación no programada sin suero y volver a suspender las células

Paso 4: siga la cantidad de 1 a 1,5 ml / tubo y póngalo en el tubo de almacenamiento congelado, apriete la tapa del tubo y marque bien.

Paso 5: mueva el criodepósito directamente al refrigerador a - 80 ° C y transfiera al nitrógeno líquido para su conservación a largo plazo después de 24 horas.

Cuando no hay congelador o congelador no programático, se puede optar por enfriar manualmente el gradiente. Sin embargo, el enfriamiento manual por gradiente no es adecuado para todas las células y el efecto es inestable, lo que también requiere una prueba de Criopreservación primero.

Precauciones:

1. después de recibir la célula, Póngase en contacto con nosotros de inmediato si encuentra que el hielo seco se ha volatilizado y limpio, la tapa del tubo de almacenamiento congelado se ha caído, está rota y la célula está contaminada.

2. no abra la tapa de la botella antes de recibir la célula, limpie el cuerpo de la botella con alcohol y póngalo en la incubadora durante 2 - 4 horas (dependiendo de la densidad celular) para estabilizar el Estado celular. A continuación, se observa el crecimiento celular bajo un microscopio invertido y se toman fotos de diferentes múltiplos de la célula (se recomienda tomar una foto de la apariencia general al recibir la célula, observar el color del medio de cultivo y si hay fugas, y luego tomar el Estado celular bajo el microscopio, 100 *, 200 * cada uno), observar y registrar si La célula está contaminada durante el transporte. Como base para nuestras ventas.

3. debido a que el Estado celular se ve afectado por muchos factores, como el medio ambiente, la operación y el transporte, la compañía solo garantiza el Estado celular del cliente dentro de la semana posterior a la recepción de la célula, por lo que el cliente debe presentar un certificado de tiempo para recibir la célula y un certificado de tiempo para que El cliente proporcione el tiempo de recepción y el tiempo de comunicación del personal de servicio después de encontrar el problema, y el intervalo no puede ser superior a 7 días.

4. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.
Productos que la compañía está vendiendo:

Fibroblasto del Músculo esquelético del ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células precursoras de oligodendrocitos nerviosos de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células precursoras de oligodendrocitos nerviosos de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células madre hematopoyéticas de médula ósea de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Condrocitos traqueales de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Fibroblasto gingival de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Linfocitos de sangre periférica de ratasVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células musculares lisas mesenquimales de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células del Músculo liso vascular de la arteria carótida de la rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células papilares de piel real de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células madre mesenquimales de brotes de extremidades embrionarias de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células de purkenye de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células madre nerviosas de la médula espinal de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células madre embrionarias de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células nerviosas del trigémino de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células periféricas microvasculares de la retina del ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células madre de pulpa dental de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células mononucleares de médula ósea de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Fibroblasto de membrana blanca del pene de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células nerviosas del trigémino de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células olfativas de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Fibroblasto de la pared vaginal del ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Condrocitos de cadera de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

293 hek - 293 (células renales embrionarias humanas) Células musculares gastrocnemiales de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células de purkenye de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Fibroblasto esclerótico de ratónVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25

Células madre embrionarias de rataVial de cultivo 5 × 10 ⁵ Cells / t25