22rv1 (células humanas de cáncer de próstata)

22rv1 (células humanas de cáncer de próstata)

Alias 22RV1; 22Rv-1; 22rV1; CWR22-Rv1; CWR22R-V1; CWR22-R1; CWR22Rv1; El CWR22R

Especies y géneros humanidad

Edad (sexo) hombre, adultos

Fuentes organizativas próstata

Características de crecimiento Células adherentes

Morfología celular Tipo de célula epitelial

Descripción de fondo 22rv1 es una línea de células epiteliales de cáncer de próstata humano derivada de un trasplante heterogéneo (transmitido continuamente en ratones con disminución del cáncer de próstata causada por la castración y recurrencia después del injerto de cwr22 de confianza androgénica de su padre); La línea celular 22rv1 expresa el antígeno específico de próstata. La dihidroxitestosterona estimuló ligeramente el crecimiento de las células 22rv1 y el producto disuelto fue detectado por Western blot para iniciar una respuesta inmune con anticuerpos receptores antiandroides; El feag estimula el crecimiento de células 22rv1, pero el TGF beta - 1 no puede inhibir el crecimiento celular; 22rv1 puede formar tumores en ratones desnudos.

Nivel de bioseguridad 2

Medio de crecimiento RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P / S

Proporción de descendientes recomendados 1: 3 - 1: 4

Frecuencia recomendada de cambio de líquido 2 a 3 veces / semana

Tiempo de duplicación ~ 40 horas

Condiciones de congelación

Liofilizado:55% medio básico + 40% FBS + 5% Dmso

Temperatura: nitrógeno líquido

Condiciones de cultivo

Fase gaseosa: aire,95%； CO2, 5%

Temperatura:37℃

Tumoral Sí, forma tumores en ratones desnudos.

Expresión del receptor receptor de andrógenos

Precauciones Las células 22rv1 necesitan centrifugación para eliminar Dmso cuando se reanuden. En la etapa inicial de la reanimación de las células congeladas, la cantidad de pared adherida es pequeña y los racimos se aflojan, pero al final las células se aplanarán y se propagarán a una buena monocapa, un proceso que tardará 4 - 5 días. Las células crecen lentamente y las células solo pueden crecer hasta el 90% de la confluencia. La tasa de supervivencia de la reanimación después de la Criopreservación celular no es alta, se recomienda que la proporción de Criopreservación sea del 90% de suero + 10% dmso, utilizando suero de alta calidad.

Precauciones:

1. después de recibir la célula, Póngase en contacto con nosotros de inmediato si encuentra que el hielo seco se ha volatilizado y limpio, la tapa del tubo de almacenamiento congelado se ha caído, está rota y la célula está contaminada.

2. no abra la tapa de la botella antes de recibir la célula, limpie el cuerpo de la botella con alcohol y póngalo en la incubadora durante 2 - 4 horas (dependiendo de la densidad celular) para estabilizar el Estado celular. A continuación, se observa el crecimiento celular bajo un microscopio invertido y se toman fotos de diferentes múltiplos de la célula (se recomienda tomar una foto de la apariencia general al recibir la célula, observar el color del medio de cultivo y si hay fugas, y luego tomar el Estado celular bajo el microscopio, 100 *, 200 * cada uno), observar y registrar si La célula está contaminada durante el transporte. Como base para nuestras ventas.

3. debido a que el Estado celular se ve afectado por muchos factores, como el medio ambiente, la operación y el transporte, la compañía solo garantiza el Estado celular del cliente dentro de la semana posterior a la recepción de la célula, por lo que el cliente debe presentar un certificado de tiempo para recibir la célula y un certificado de tiempo para que El cliente proporcione el tiempo de recepción y el tiempo de comunicación del personal de servicio después de encontrar el problema, y el intervalo no puede ser superior a 7 días.

4. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

Tratamiento celular:

1) reanimación de las células liofilizadas: agitar y descongelar rápidamente el tubo liofilizado que contiene 1 ml de suspensión celular en un baño de agua a 37 ° C y añadir al tubo centrífuga que contiene 4 - 6 ml de medio de cultivo para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y suspender las células en el medio de cultivo. A continuación, la suspensión celular se agregó al frasco de cultivo (o placa de petri) que contenía 6 - 8 ml de medio de cultivo para cultivar a 37 ° C durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 70% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión. La célula es una célula suspendida y ligeramente adherida a la pared, y la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

1. recogida: recoger las células suspendidas del frasco de cultivo en un tubo centrífuga. Lavar las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio. Debido a que las células no se adhieren firmemente a la pared, las células se caerán después de humedecer el pbs, por lo que el PBS también debe reciclarse en el tubo centrífuga.

2. añadir 0,25% (w / v) 0,53 mm EDTA al matraz de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml) en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se desprenden rápidamente y se recuperan de la Mesa de operaciones, añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo que contiene 10% FBS después de golpear ligeramente el matraz para terminar la digestión.

3. centrifugar las células suspendidas recogidas, las células en el limpiador de PBS y las células adherentes digeridas durante 5 minutos a 1000 rpml, descartar el sobrenadante, complementar el medio de cultivo de 1 - 2 ML y volver a suspender y mezclar bien, dividir la suspensión celular en el nuevo frasco t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y continuar la transmisión en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25:

1. al congelar las células, se recogen las células digeridas en el tubo centrífuga de acuerdo con el proceso de transmisión celular, y se puede contar con una placa de recuento de sangre para determinar la densidad de congelación de las células. La densidad de Criopreservación recomendada de las células generales es de 1 × 10 ⁶ a 1 × 10 ⁷ células vivas / ML.

2. centrifugar 1000 RPM durante 3 - 5 min y eliminar el sobrenadante. Las células se resuelven con el liofilizado celular preparado y se asignan a un liofilizado de acuerdo con el contenido de 1 × 10 ⁶ a 1 × 10 ⁷ células vivas / ML por cada 1 ml de liofilizado, marcando el nombre, el álgebra, la fecha y otra información.

3. coloque las células que se van a congelar en la Caja de enfriamiento del programa, pase la noche en el refrigerador de - 80 grados y luego pase al recipiente de nitrógeno líquido para su almacenamiento. Al mismo tiempo, se registra la ubicación del congelador en el contenedor de nitrógeno líquido para su posterior consulta y uso.

Pasos de operación:

Paso 1: retire el liofilizado no programático sin suero del refrigerador, listo para usar

Paso 2: recolección centrífuga de células en crecimiento logarítmico (las células adherentes se digieren y centrifugan, las células suspendidas se centrifugan directamente, la velocidad de rotación es de 1200 rpm o 250g, el tiempo es de 3 minutos)

Paso 3: descartar la shangqing, añadir una cantidad adecuada de Criopreservación no programada sin suero y volver a suspender las células

Paso 4: siga la cantidad de 1 a 1,5 ml / tubo y póngalo en el tubo de almacenamiento congelado, apriete la tapa del tubo y marque bien.

Paso 5: mueva el criodepósito directamente al refrigerador a - 80 ° C y transfiera al nitrógeno líquido para su conservación a largo plazo después de 24 horas.

Cuando no hay congelador o congelador no programático, se puede optar por enfriar manualmente el gradiente. Sin embargo, el enfriamiento manual por gradiente no es adecuado para todas las células y el efecto es inestable, lo que también requiere una prueba de Criopreservación primero.

Productos que la compañía está vendiendo:

Ccrf - Cem (linfocitos t de leucemia linfoblástica aguda humana)

A9 (células del tejido conjuntivo subcutáneo de ratón)

AAV - 293 (células renales embrionarias humanas)

ACC - 2 (células de cáncer quístico adenoide salival humano)

Achn (células de adenocarcinoma de células renales humanas)

AGS (células de adenocarcinoma gástrico humano)

Ana - 1 (macrófagos de ratón)

Anglne (células de cáncer de ovario humano)

Ar42j (células exocrinas del páncreas de rata)

Arpe - 19 (células epiteliales de la retina humana)

Aspc - 1 (células humanas de adenocarcinoma pancreático metastásico)

Att - 20 (células tumorales pituitarias de ratón)

B16 (células de melanoma de ratón)

Bcap - 37 (células humanas de cáncer de mama)

Bel - 7402 (células humanas de cáncer de hígado)

Factor trébol intestinal de cerdoKit de prueba Elisa (itf)

Linfotóxico humanoKit de detección su beta (ltb)

Cerdo baisukeKit de detección su3 (il - 3)

Proteína metálica de matriz de hámsterKit mei9 / gelatina meib (mmp - 9 / gelatinase b) Elisa

Virus del oído azul porcinoKit RT - PCR

Virus del esturión blancoKit PCR

Virus globular de AbulónKit de detección PCR

Nematodos NEIKit de detección PCR

Estafilococos de ArletKit PCR

HistoplasmaKit PCR

Plantas transgénicasKit de detección PCR del gen PAT

22rv1 (células humanas de cáncer de próstata)Estafilococos de ArletKit PCR

1 (kit PCR RT - 1 para el virus del herpes Takin tipo 1

TripanosomaKit PCR

Virus de la peste porcina africanaKit de detección PCR