Método de lavado del kit Elisa de ratón que contiene anillo similar a la inmunoglobulina y dominio similar al factor de crecimiento epitelial 2 (tie - 2):

1. lavadora automática de placas: añadir 350 μl de detergente a cada agujero, con un intervalo de 60 segundos entre la inyección y la extracción. Lavar la placa 5 veces.

2. lavado manual de la placa: retire todo el líquido del agujero, seque en papel absorbente limpio, agregue 350 μl de detergente a cada agujero, remoje durante 1 - 2 minutos, absorba (no toque la pared de la placa) o deshaga el líquido de la placa estándar enzimática, y seque en papel absorbente grueso. Lavar la placa 5 veces.

Antes del inicio del experimento, cada reactivo debe equilibrarse a temperatura ambiente; Al preparar reactivos o muestras, deben mezclarse completamente y tratar de evitar ampollas.

1. adición de muestras: se establecen agujeros en blanco, agujeros estándar y agujeros de muestra a medir, respectivamente. Añadir 100 μl de diluyente de muestra a los agujeros en blanco y 100 μl de estándar o muestra a medir a los agujeros restantes, prestar atención a no tener burbujas de aire, añadir la muestra a la parte inferior de la placa estándar enzimática al agregar la muestra, tratar de no tocar la pared del agujero, sacudir suavemente y mezclar bien. Cubrir la placa estándar de la enzima e incubarla a 37 ° C durante 2 horas. Para garantizar la validez de los resultados experimentales, utilice una nueva solución estándar para cada experimento.

2. deseche el líquido, revuelva seco, agregue 100 μl de líquido de trabajo Detection AB (preparado dentro de los 15 minutos anteriores al uso) a cada agujero, agregue una placa estándar enzimática con película y cultive a 37 ° C durante 1 hora.

3. desechar el líquido del agujero, secarlo y lavar la placa tres veces, remojarlo durante 1 - 2 minutos cada vez, aproximadamente 350 μl / agujero, Sacudirlo y palmaditas ligeras en el papel absorbente para secar el líquido del agujero.

4. agregue 100 μl de líquido de trabajo HRP conflugate (preparado dentro de los 15 minutos anteriores al uso) a cada agujero, agregue película y cultive a 37 ° C durante 1 hora.

5. descartar el líquido en el agujero, secarlo, lavar la placa 5 veces, y el método se sincroniza con 3.

6. añadir 100 μl de solución de sustrato por agujero, placa estándar enzimática más película cubierta a 37 ° C para incubar a la luz durante unos 15 minutos (acortar o alargar según corresponda de acuerdo con la situación real de color, pero no más de 30 minutos. se puede terminar cuando el agujero estándar presenta un gradiente obvio).

7. añadir 50 μl de líquido de terminación a cada agujero para detener la reacción, cuando el azul se convierte en amarillo. El orden de adición de la solución de terminación debe ser el mismo que el orden de adición de la solución de sustrato en la medida de lo posible.

8. medir inmediatamente la densidad óptica (valor de do) de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de enzima. Se debe encender la fuente de alimentación del medidor de enzima con antelación, calentar el instrumento y establecer el procedimiento de detección.

9. después del experimento, los reactivos no agotados se devuelven al refrigerador a la temperatura de conservación prescrita para conservarlos hasta el final del período de validez.