Trzol (reactivo total de extracción de arn)

Trzol (reactivo total de extracción de arn)

Introducción del producto:

Los reactivos trzol son reactivos que extraen el ARN total directamente de las células o tejidos. Mantiene la integridad del ARN al romper y disolver las células. Después de agregar cloroformo, la muestra se centrifuga y se divide en una capa de muestra de agua y una capa orgánica. El ARN está presente en la capa de muestra de agua. Después de recoger la capa de muestra de agua anterior, el ARN se puede recuperar a través de la precipitación de alcohol isopropílico.

Ya sean tejidos humanos, animales, vegetales o bacterianos, este método tiene un mejor efecto de aislamiento en pequeñas y grandes cantidades de tejidos y células. La simplicidad operativa del reactivo trzol permite procesar varias muestras al mismo tiempo. Todas las operaciones se pueden completar en una hora. El ARN total extraído por trzol es capaz de evitar la contaminación del ADN y las proteínas. Por lo tanto, puede hacer análisis de impresión de arn, hibridación de manchas, selección Poly (a) +, transcripción in vitro, análisis de protección enzimática de ARN y clonación molecular.

El reactivo trzol puede promover la precipitación de una variedad de ARN de diferentes especies, géneros y diferentes tamaños moleculares. Por ejemplo, el ARN extraído del hígado de la rata, por medio de la página de gel de agarosa y teñido con bromuro de etidio, mostró muchas bandas de alto peso molecular discontinuas entre 7 y 15 kb (componentes de arnm y hnrna), dos ribosomas dominantes a 5 kb (28s) y a 2 kb (18s), y ARN de bajo peso molecular mediado entre 0,1 y 0,3 kb (arnt, 5s). Cuando el ARN extraído se diluye con te, su relación a 260 / a 280 es ≥ 1,8.

Almacenamiento del producto: trzol se puede conservar de manera estable a temperatura ambiente durante 12 meses. Sin embargo, para lograr buenos resultados, recomendamos conservarlos en un ambiente de 2 - 8 ° c. (para los detalles de la operación, consulte las instrucciones)

I. ADN de plantilla: la respuesta PCR requiere ADN de plantilla, como la extracción de ADN de células, tejidos, sangre, etc.;

2. primer: dos primeros de la reacción pcr, que se emparejan con los dos extremos del ADN de la plantilla para ampliar las áreas específicas necesarias, los primeros también se pueden sintetizar en los primeros utilizados en el proceso de clonación de ta;

3. dntps: en la reacción PCR se necesitan cuatro dntps, incluidos el ácido Desoxiadenilato (dptp), el ácido desoxitimidina (dctp), el ácido desoxiguanídico (dgtp), el ácido Desoxicitidina (ddtp), para procesos biológicos como la División celular y la síntesis de adn, y la extensión y amplificación de la cadena de ADN de la plantilla amplificada por pcr;

IV. polimerasa de ADN taq: la polimerasa necesaria para la reacción pcr, generalmente la polimerasa taq, y algunos otros tipos de polimerasa como pfu, phusion, etc., se utilizan para expandir la cadena de adn;

V. solución de tampón pcr: tiene un efecto amortiguador sobre la reacción pcr, ajusta el pH de la reacción, el tiosulfato de hidrógeno sds, compuestos orgánicos de moléculas pequeñas como el formaldehído, puede mejorar la especificidad de la reacción PCR y, por lo tanto, mejorar la eficiencia de la reacción;

6. sistema de enzima: la amplificación PCR a menudo implica pasos experimentales como recombinación, construcción y secuenciación, y a menudo requiere operaciones de enzima.

7. mark: un estándar de peso molecular utilizado para distinguir el tamaño de un fragmento de adn.

8. kit de purificación de adn: utilizado para purificar productos de reacción pcr;

Gachas desnudas; oligómeros DT
Al elegir oligo dt, se requiere que el ARN tenga Poly a, por lo que el arnm de los eucariotas es adecuado. La rt adecuada para arnm de cadena larga o incluso de longitud completa requiere una mayor calidad de las muestras de arn, sin contaminación obvia del adn, degradación del ARN y ruptura del arn. Si desea explorar nuevos arnm para la respuesta rt, se recomienda usar el primer oligo dt. El uso de Primers oligo DT es más estable que los Primers aleatorios y los Primers específicos.
② primer aleatorio
RT adecuado para varios arn, especialmente para situaciones en las que la abundancia de plantillas es muy baja (por ejemplo, la expresión de un gen es muy baja). Al seleccionar los primeros aleatorios, todos los ARN se utilizan como plantillas en la reacción de síntesis de cDNA de cadena, y luego los primeros se diseñan en la reacción PCR para la amplificación específica. Al mismo tiempo, se debe prestar atención a la relación entre la cantidad de Primers aleatorios y la cantidad de ARN total. en general, se recomienda que la cantidad de Primers aleatorios por cada 5 microgramos de ARN total sea de 50 ng. si la cantidad de Primers aleatorios por cada 5 microgramos de ARN total supera los 250 ng, puede conducir a un Aumento de los productos de fragmentos pequeños (menosde 500 bp) y una disminución de los productos de fragmentos largos y largos.
③ primer específico
El primer específico del gen (gsp) es un primer que forma parte de una secuencia genética y complementa la plantilla. El primer necesita ser diseñado en combinación con una secuencia conocida del ARN objetivo. Debido a la Unión específica de los primeros y la secuencia de arn, cada ARN objetivo necesita un nuevo conjunto de primeros específicos genéticos. Por lo tanto, al analizar múltiples objetivos, es necesario aplicar más muestras de arn. Y la temperatura de recocido de los diferentes primeros ya es diferente, por lo que generalmente no se recomienda su uso. Si se necesitan cebadores específicos, se recomienda optimizar la temperatura de recocido.