Scc7 (células de carcinoma de células escamosas de ratón)

I. atributos básicos de la célula

Fuente del tejido: carcinoma de células escamosas

Características de crecimiento: crecimiento pegado a la pared

Morfología celular: similar a las células epiteliales

Introducción de antecedentes: las células de cáncer de células escamosas de ratones scc7 se refieren a las células que obtienen células individuales de tejidos u órganos del cuerpo, colagenasa, otros métodos y las cultivan in vitro para simular el entorno del cuerpo.

Nivel de bioseguridad: 1

Especificaciones celulares: vial de cultivo 1 × 106cells / t25 o envase de criodepósito de 1 ml

Medio de cultivo: 1640 + 10% FBS

Condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

Condiciones de congelación: liofilizado: 90% fbs, 10% dmso,

Tiempo de duplicación: 2 a 3 veces por semana

Proporción de generaciones: 1: 2 generaciones

Frecuencia de cambio de líquido: cambio de líquido una vez cada 2 - 3 días

II. operaciones de cultivo celular

1) células de reanimación: el siguiente tratamiento de Criopreservación de cultivo celular es solo para referencia, y los pasos de operación específicos son principalmente las instrucciones del producto con el envío.

El criodepósito que contenía 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se mezcló uniformemente con un medio de cultivo de 4 ML. Centrifugar durante 3 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo para soplar bien. A continuación, todas las suspensiones celulares se añaden a un matraz que contiene un medio adecuado para el cultivo durante la noche (o las suspensiones celulares se añaden a una placa de Petri de 6 cm, se añaden unos 4 ml de medio para el cultivo durante la noche). El tercer día se cambió el líquido y se examinó la densidad celular.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

a、 Cuando las células crecen hasta cubrir el 80% del área del frasco de cultivo, abandonan el medio de cultivo en el frasco de cultivo de 25 cm 2 y limpian las células con PBS una vez;

b、 Añadir alrededor de 1 ml de líquido digestivo al 0,25% al frasco de cultivo, observar bajo un microscopio invertido, añadir el medio de cultivo para terminar la digestión después de que la célula se reduzca y redondee, luego soplar suavemente la célula para que se desprenda, y luego transferir la suspensión a un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugar 1000 RPM durante 5 minutos;

c、 Descartar el sobrenadante, suspender las células precipitadas con un medio de cultivo de 12 ml, luego pasar por botella en una proporción de 1: 2, y finalmente colocarlas en una incubadora de células CO2 de 37 ° C y 5%;

d、 Después de que la célula se adhiere a la pared, se observan los resultados del cultivo, y luego se realiza el cultivo de cambio de líquido o la transmisión.

3) Criopreservación celular: cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25;

a、 Cuando las células crecen hasta cubrir el 80% del área del frasco de cultivo, abandonan el medio de cultivo en el frasco de cultivo de 25 cm 2 y limpian las células con PBS una vez;

b、 Añadir alrededor de 1 ml de líquido digestivo al 0,25% al frasco de cultivo, observar bajo un microscopio invertido, añadir el medio de cultivo para terminar la digestión después de que la célula se reduzca y redondee, soplar suavemente la célula para que se desprenda, y luego transferir la suspensión a un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugar 1000 RPM durante 5 minutos;

c、 Volver a suspender las células con una cantidad adecuada de liofilizado (fbs: Dmso = 9: 1) y colocarlas en el liofilizador;

d、 Primero se colocó el criodepósito celular a - 20 ° c 1,5h, luego se trasladó a - 80 ° C durante la noche y luego se transfirió al nitrógeno líquido durante 24 horas para su conservación a largo plazo. Usando el programa, la Caja de enfriamiento se puede poner directamente en - 80 ℃.

III. precauciones de capacitación

1. después de recibir la célula, primero observe si la botella celular está intacta, si el medio de cultivo tiene fugas, turbidez y otros fenómenos, si hay los fenómenos anteriores, Póngase en contacto con nosotros a tiempo.

2. lea cuidadosamente las instrucciones de la célula para comprender la información relacionada con la célula, como la morfología celular, el medio de cultivo utilizado, la proporción de suero, las citocinas necesarias, etc., para asegurarse de que las condiciones de cultivo celular sean consistentes, y si las condiciones de cultivo son inconsistentes y causan problemas con la célula, la responsabilidad recae en el cliente.

3. limpie la superficie del vial celular con un 75% de alcohol y observe el Estado celular bajo un microscopio. Debido a problemas de transporte, es normal que algunas células formen fragmentos debido a cambios de temperatura y colisiones violentas. Después de observar el Estado celular, el 75% de la pared del vial de desinfección con alcohol colocó el vial t25 en una incubadora a 37 ° C durante 2 - 4 horas.

4. las células adherentes se pueden digerir, las células suspendidas se mezclan directamente para recoger las células, 900 RPM - 1000 RPM se centrifugan durante 3 minutos y se abandonan el sobrenadante. Añadir 5 ml de células de suspensión pesada pbs, luego centrifugar 900 RPM - 1000 RPM durante 3 minutos, suspender las células con un medio fresco y vacunarlas en un nuevo frasco o placa de petri, colocarlas en una incubadora para su cultivo.

5. se pide a los clientes que utilicen medios de cultivo en las mismas condiciones para el cultivo celular.

6. se recomienda que los clientes tomen varias fotos de las células tres días antes de recibir las células para registrar el Estado de las células y facilitar la comunicación con nuestro Departamento técnico. Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear la visita de regreso hasta que se resuelva el problema.

7. la célula es solo para uso científico.

8. nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Se recomienda la primera transmisión después de recibir la célula 1: 2.

9. nota: la transmisión de 1: 2 es una botella t25, dos botellas t25 o dos placas de Petri de 6 cm. No una botella t25 pasa por dos placas de Petri de 10 cm.

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