Células primarias de rata

Células primarias de rataMétodo de transmisión:

I. el método digestivo de las células adheridas a la pared

1. aspirar o verter el viejo medio de cultivo en la botella.

2. agregue alrededor de 1 ml de líquido digestivo (mezcla con edta) y agite suavemente el frasco de cultivo para que las células del Fondo del frasco se sumerjan en la solución.

3. después de 2 - 5 minutos de digestión, se colocó el frasco de cultivo bajo un microscopio para observar y se encontró que las células adheridas a la pared original tendían gradualmente a ser redondas. cuando aún no habían flotado, se abandonó el líquido digestivo y se agregó el medio de cultivo para terminar la digestión.

4. soplar las células adheridas a la pared en una suspensión con una pajita, inocularlas en otros dos o tres frascos de cultivo, y colocarlas en una incubadora de 37 ° C para continuar el cultivo. Al día siguiente, se observó el crecimiento de la pared.

II. paso de células suspendidas

1. transmisión directa

1) deje que las células suspendidas se depositen lentamente en el Fondo de la botella y absorba el líquido superior 1 / 2 - 2 / 3.

2) después de soplar con una pajita para formar una suspensión celular, se inocula en otros dos o tres frascos de cultivo y se cultiva en una incubadora de 37 ° c.

2. transmisión por centrifugación

1) transferir la célula al tubo centrífuga junto con el medio de cultivo, centrifugar 800 - 1000 rpm, durante 5 minutos.

2) eliminar el sobrenadante, añadir un nuevo medio de cultivo en un tubo centrífuga y soplarlo con una pajita para formar una suspensión celular.

3) inocular la suspensión celular en otros dos o tres frascos de cultivo y cultivarla en una incubadora de 37 ° c.

Células primarias de rata5 errores comunes en el cultivo

Error 1:Un pequeño tubo de células primarias se descongela en un baño de agua durante un período de tiempo

Corrección 1: las células primarias son muy sensibles al proceso de descongelación, por lo que es importante colocar el vial en un baño de agua a 37 ° c, mantenerlo y girarlo suavemente hasta que el contenido acaba de descongelarse. A continuación, el vial debe extraerse inmediatamente del baño de agua y transferirse a la Mesa de operaciones estéril. Asegúrese de que su botella de cultivo esté lista antes de descongelarla para que pueda usarse inmediatamente para vacunar las células y colocarse en una incubadora.

Error 2:Centrifugar directamente las células primarias después de descongelar el vial

Corrección 2:No recomendamos centrifugar las células después del descongelamiento, ya que los procedimientos de centrifugación son más dañinos que las pequeñas cantidades de residuos de dmso. Recuerde, cambie el medio de cultivo al día siguiente de restaurar las células primarias para eliminar cualquier Dmso residual.

Error 3:Permitir que las células primarias se vuelvan demasiado fusionadas

Corrección 3:Cuando crece hasta la confluencia de 100, las células primarias pueden envejecer. Recuerde que las células primarias no son 100 puras, por lo que es importante minimizar el crecimiento de células contaminantes. Recomendamos que las células primarias se cultiven de generación en generación cuando alcancen una fusión del 90 - 95%.

Error 4:Las células primarias pueden volver a congelarse fácilmente.

Corrección 4:Por lo general, no recomendamos volver a congelar las células primarias, ya que esto puede promover el envejecimiento celular y / o causar cambios funcionales. Las células primarias son muy sensibles y la recongelación puede causar la muerte o el daño de las células.

Error 5:Las células primarias pueden proliferar infinitamente

Corrección 5:A diferencia de las líneas celulares, las células primarias tienen una capacidad de expansión limitada. Recomendamos el uso temprano de células primarias para experimentos para evitar la deriva genética. Además, si está utilizando un tipo de célula con dificultades de apreciación del valor, debe monitorear de cerca la morfología celular, ya que un pequeño número de células mixtas, como los fibrocitos, pueden crecer en grandes cantidades con el tiempo y convertirse así en las células Principales.