Marca de embriones de ratón 3t3 - L1

Información sobre productos básicos:

Liofilizado: 55% medio básico + 40% FBS + 5% Dmso

Temperatura: nitrógeno líquido

Esquema de formación a (predeterminado):Medio de crecimiento: dmem + 10% NCS + 1% P / s

Condiciones de cultivo:Fase gaseosa: aire, 95%; CO2， 5%, temperatura: 37 ° C

Proporción de descendientes recomendados1: 3 - 1: 4

Descripción de fondoLas células 3t3 - L1 son subtipos continuos de 3t3 (ratones swiss) obtenidos por aislamiento clonal. Cuando las células 3t3 - L1 pasan de la División rápida a la plenitud y la inhibición del contacto, las células 3t3 - L1 se revierten hacia la grasa a través de la grasa pregrasa. En el medio de cultivo, el alto contenido de suero puede promover la acumulación de grasa en las células 3t3 - l1.

Edad (sexo)Embrión

Tipo de célulaCélulas inmortalizadas espontáneas

Nivel de bioseguridadBSL-1

Expresión del receptorinsulina, expresada

Agencia de conservaciónATCC; CL-173 ATCC; CCL-92.1BCRC; 6015

Transporte y conservación:

Transporte de hielo seco y reanimación de células vivas

(1) transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ml, después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, póngase en contacto con nosotros de inmediato.

(2) las células sobrevivientes de la recuperación de t25 se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

Tratamiento después de la recepción celular:

1) después de recibir la célula, el 75% de la pared de la botella de desinfección con alcohol coloca la botella t25 en una incubadora de 37 ° C durante aproximadamente 2 - 3 horas. si se encuentra que la botella de cultivo está rota, hay un derrame de líquido y la célula está contaminada, Póngase en contacto con nosotros a tiempo después de tomar una foto.

2) confirme el Estado de la célula bajo un microscopio 4 o 5x, mientras toma una foto de la célula recién recibida (10 × 20 × cada una) y una foto de la apariencia del frasco de cultivo como base para el Estado de la célula en el momento de la recepción después de la venta.

3) células adheridas: las células se colocan en una incubadora a 37 ° C durante 2 - 3h para observar el crecimiento y la adherencia de las células bajo un microscopio, y algunas células adheridas se desprenden y se agrupan debido a la vibración durante el transporte expreso. Si se observa la densidad de crecimiento de las células bajo el microscopio por debajo del 60%, se puede eliminar el medio de cultivo de infusión en el frasco de cultivo (si hay células no adheridas que necesitan recuperación centrífuga, se suspende en el frasco de cultivo original), se añade el medio de cultivo recién preparado de 6 - 8 ML y se coloca En una caja de cultivo celular para continuar el cultivo. Si la densidad de crecimiento celular alcanza más del 70% - 80%, la célula puede ser tratada de generación en generación. Durante el proceso de transmisión, si las células que se desprenden debido al transporte de vibraciones necesitan ser recicladas por centrifugación.

Tratamiento celular:

1) recuperación de células congeladas:

El criodepósito que contiene 1 ml de suspensión celular se sacude rápidamente y se descongela en un baño de agua a 37 ° c, y se mezcla uniformemente en el tubo centrífuga que contiene un medio de cultivo de 4 - 6 ML. Centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y suspender las células en el medio de cultivo. A continuación, la suspensión celular se agregó al frasco de cultivo (o placa de petri) que contenía 6 - 8 ml de medio de cultivo para cultivar a 37 ° C durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

Para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos:

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 0,25% (w / v) - 0,53 mm EDTA al frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de Las células se redondean y se desprenden, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con un 10% de FBS después de golpear ligeramente el frasco para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de un nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

Productos que la compañía está vendiendo: