En el campo de las ciencias de la vida, las sondas de ADN marcadas con fluorescencia (en adelante, "sondas fluorescentes") son ampliamente utilizadas para detectar e identificar ADN específico. Las sondas fluorescentes se unen selectivamente a un ADN específico, por lo que se puede utilizar un marcador fluorescente para detectar un ADN específico. Debido a que hay muchos tipos de luciferina, es importante dominar la longitud de onda de fluorescencia de las sondas fluorescentes al detectar adn. Este artículo le presenta el usoEspectrómetro de fluorescencia RF - 6000Función de espectrometría tridimensional, ejemplo de determinación de fluorescencia de dos sondas fluorescentes

Instrumentos, métodos de determinación y resultados:

La figura 1 muestra la apariencia del RF - 6000. El RF - 6000 tiene una función de determinación espectral tridimensional y una función de corrección espectral automática, que puede determinar un rango de longitud de onda más amplio en poco tiempo. La función de corrección espectral automática se refiere a la función de obtener automáticamente el espectro de corrección sin verse afectada por el instrumento (sin utilizar la función del instrumento), que puede obtener automáticamente el espectro de fluorescencia correcto y el espectro de excitación en el momento de la determinación.

En este análisis, las sondas fluorescentes a y b marcadas con diferentes luciferinas fueron analizadas por espectrometría tridimensional, respectivamente. Al probar el espectro tridimensional, se cambia la longitud de onda de excitación a su vez y se determina el espectro de fluorescencia, de modo que se obtiene el espectro tridimensional. En los datos obtenidos, el espectro de fluorescencia correspondiente al eje transversal (em) y el espectro de excitación correspondiente al eje longitudinal (ex). La figura 2 muestra los resultados de la determinación de la sonda fluorescente a; La figura 3 muestra los resultados de la determinación de la sonda fluorescente B. Estos son espectros tridimensionales compuestos por espectros de corrección. El tiempo de determinación de cada muestra es de unos 3 minutos. Como se muestra en la flecha, la sonda fluorescente a aparece principalmente en los picos de fluorescencia ① y ②, y la sonda fluorescente B aparece principalmente en los picos de fluorescencia ①. El Pico ① de la sonda fluorescente a (figura 2) se estimula a 550 nm, con una longitud de onda de fluorescencia de unos 600 nm; el pico ② se estimula a 510 nm y una longitud de onda de fluorescencia de unos 530 nm. el pico ① de la sonda fluorescente b (figura 3) se estimula a 550 nm y una longitud de onda de fluorescencia de unos 600 nm.

Determinación espectral

El espectro de fluorescencia y el espectro de excitación se interceptan libremente en cualquier coordenada del espectro tridimensional. En este momento, el espectro interceptado en la dirección del eje transversal se utilizará como espectro de fluorescencia; Interceptación en la dirección del eje longitudinal

El espectro se utilizará como espectro de excitación. En el espectro tridimensional de la sonda fluorescente a (figura 2), se obtuvieron los espectros de fluorescencia de los picos ① y ②, que se muestran en la figura 4 y la figura 5, respectivamente. La imagen muestra que la longitud de onda de fluorescencia del pico ① es de 598 nm; la longitud de onda de fluorescencia del pico ② es de 532 nm. en el espectro tridimensional de la sonda de fluorescencia b (figura 3), se obtuvieron el espectro de fluorescencia y el espectro de excitación del pico ①. Las figuras 6 y 7 muestran el espectro de fluorescencia y el espectro de excitación, respectivamente. De esto se desprende que la longitud de onda de fluorescencia es de 604 nm y la longitud de onda de excitación óptima es de 550 nm. además, el espectro de corrección que no se ve afectado por el instrumento se obtiene a través del espectro tridimensional, lo que permite detectar la posición correcta de la longitud de onda de fluorescencia.

Resumen: el espectro tridimensional de la sonda fluorescente se ha determinado con un fotómetro fluorescente y el espectro de corrección se puede obtener automáticamente. El uso de modelos tradicionales para obtener espectros de corrección requiere un procesamiento manual de datos, mientras que el RF - 6000 no requiere esta operación. En resumen, el uso de RF - 6000 puede realizar mediciones de fluorescencia con alta precisión y alta eficiencia.