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¿¿ cuál es la tecnología central del detector rápido de peste porcina africana? ¿¿ por qué se puede identificar con precisión el virus?

"¿ por qué el detector puede encontrar el virus en decenas de minutos?" "¿ cuáles son las diferencias de precisión entre los diferentes equipos y qué puertas técnicas se esconden?" los "ojos de fuego y los ojos dorados" del detector rápido de peste porcina africana se derivan de los avances en tres tipos de tecnologías básicas. Estas tecnologías logran un juicio preciso desde "si hay o no virus" hasta "cuánto virus" bloqueando el "logotipo único" del virus, detrás de la profunda integración de la biología molecular y la tecnología de ingeniería.

I. técnica de inmunocromatografía de oro coloide: "centinela de base" con resultados en 15 minutos

El detector rápido de oro coloide es un equipo para hogares dispersos, y su esencia técnica central es la "unión específica de antígenos virales y anticuerpos", similar a la coincidencia precisa de "cerraduras de llaves".

La tarjeta de detección de este tipo de equipos esconde dos líneas clave: la línea de detección (línea t) fija el anticuerpo específico de la proteína P72 del virus de la peste porcina africana, y la línea de control de calidad (línea c) fija el anticuerpo anti - oro. En el momento de la prueba, el antígeno viral en la muestra se unirá al anticuerpo marcado con oro coloide para formar un complejo "anticuerpo marcado con oro - antígeno viral". cuando el compuesto fluye a la línea t, será capturado por el anticuerpo de la línea t, y el oro coloide agregado formará una banda roja, lo que indica positivo; Los anticuerpos estándar de oro no Unidos continuarán fluyendo hacia la línea c y serán capturados, formando una banda roja para confirmar que la prueba es efectiva.

La precisión de esta técnica proviene de la "especificidad" de los anticuerpos frente a la proteína p72, que solo se unen al virus de la peste porcina africana y no responden a otros virus como la peste porcina clásica y la enfermedad del oído azul, con una especificidad de más del 95%. La experiencia del maestro li, un Criador al aire libre en shandong, lo confirma: "detectar cerdos con tarjetas de oro coloidales, dar resultados en 15 minutos, enviar al laboratorio para su revisión posterior es consistente, no hay errores de juicio". sin embargo, su sensibilidad es limitada, solo se pueden detectar virus de concentración media y alta (≥ 1000 copias / μl), que es más adecuado para la detección preliminar de emergencia.

2. tecnología de PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real: el "estándar de oro" para el diagnóstico preciso

La tecnología PCR es el núcleo de la detección de diagnóstico en granjas porcinas pequeñas y medianas, y su núcleo es "amplificación específica y rastreo fluorescente de ácidos nucleicos virales", que pueden capturar con precisión la existencia de virus de una sola copia.

La lógica de detección de este tipo de dispositivos se divide en tres pasos: primero destruir la carcasa del virus a través de un lisado y extraer su ADN único (el objetivo es el gen b646l altamente conservador, que es común a todos los virus de la peste porcina africana); Posteriormente, se añaden Primers específicos para bloquear el fragmento genético b646l como un "ancla de localización", y bajo la acción de la polimerasa de adn, el fragmento objetivo se amplifica millones de veces a través de la reacción circular de "desnaturalización - recocido - extensión"; Al mismo tiempo, la sonda fluorescente liberará la señal fluorescente con el proceso de amplificación, y el equipo calculará la cantidad inicial de virus rastreando la intensidad de la señal en tiempo real.

Los datos medidos del PCR Th - P800 muestran que puede detectar hasta 10 copias / μl de virus, lo que equivale a encontrar un grano de sal en una tonelada de agua. Zhao lei, veterinario de una granja porcina en hebei, explicó: "incluso si el cerdo acaba de infectarse y la cantidad de virus en la sangre es muy pequeña, puede ser capturado por señales fluorescentes después de 30 amplitudes circulares, que es la clave para su diagnóstico temprano". la especificidad de esta técnica se debe a que la secuencia de primer diseñada para el gen b646l es del virus de la peste porcina africana y no se une a los genes de otros virus.

III. tecnología combinada RPA - crispr / cas12a: una nueva generación de "manos rápidas precisas"

Como nueva tecnología que ha surgido en los últimos años, el dispositivo combinado RPA - crispr ha logrado una combinación de "rápido y preciso", con una sensibilidad que incluso va más allá de la PCR tradicional, y el núcleo es "amplificación isotópica + doble verificación de herramientas de Edición genética".

Su proceso de detección se divide en dos pasos: paso a paso, a través de la tecnología de amplificación de polimerasa enzimática recombinante (rpa), el gen b646l del virus se amplifica a un nivel detectable en 15 minutos a una temperatura constante de 37 - 42 grados celsius, lo que resuelve el problema del tiempo que tarda la PCR tradicional en aumentar y enfriar repetidamente; El segundo paso para activar el crrna prediseñado del sistema crispr / cas12a encontrará el gen viral amplificado como un "guía", activando la actividad de corte de cas12a para que Corte las moléculas reporteras fluorescentes cercanas y libere señales fluorescentes.

La investigación del Instituto de Shenzhen muestra que la sensibilidad de la tecnología alcanza los 20 copies / ML y puede lograr la detección de doble modo colorimétrico y fluorescente: las muestras positivas serán amarillas y, al mismo tiempo, emitirán señales fluorescentes, lo que evita errores de juicio causados es es por interferencias ambientales. En 12 pruebas de muestras reales de sangre porcina, su precisión alcanzó el 100% y no reaccionó cruzadamente con otros virus de la enfermedad porcina. Liu feng, Director veterinario de un grupo de cría, comentó: "antes se necesitaban dos horas para usar pcr, pero ahora se utilizan equipos RPA - crispr para producir resultados en 40 minutos, con mayor precisión, especialmente adecuados para la detección por lotes. ",

IV. contraseña común para la identificación precisa: bloquear el "logotipo único" del virus

Cualquiera que sea la tecnología, el núcleo de la identificación precisa es bloquear las "características insustituibles" del virus de la peste porcina africana:

Especialidad del objetivo: todos se basan en el gen b646l altamente conservador del virus como objetivo de detección, que existe en todas las cepas del virus de la peste porcina africana y tiene pocas mutaciones para garantizar que no se pierdan pruebas ni se juzguen erróneamente;

Amplificación de la señal: ampliar el ácido nucleico del virus traza millones de veces a través de la tecnología PCR o rpa, y luego convertir el "virus invisible" en "resultado visible" a través de señales como fluorescencia y oro coloide;

Unión específica: la Unión de anticuerpos a antígenos, Primers y genes es como una "coincidencia de huellas dactilares", que solo responde al virus de la peste porcina africana y elimina los falsos positivos causados por la contaminación cruzada desde la Fuente.

Una granja de cerdos en Henan perdió más de 100.000 yuanes debido a un error de juicio causado por el uso de equipos no calificados. Se puede ver que la precisión del equipo no solo depende del tipo de tecnología, sino que también está estrechamente relacionada con la selección del objetivo y la calidad del reactivo. Para los agricultores, comprender estos principios técnicos puede juzgar más claramente si el equipo está adaptado a las necesidades de detección de emergencia y selección de oro coloide, diagnóstico preciso con pcr, pruebas por lotes de alta eficiencia pueden prestar atención a la nueva tecnología RPA - crispr.